紫草素誘導人絨毛膜癌細胞凋亡及其機制的探討.pdf

1、尋找低毒高效的天然抗腫瘤藥物一直是近年來抗腫瘤藥物研究的熱點。紫草素已證實具有多方面的藥用價值，且對人的正常細胞毒性較小。已有實驗研究表明紫草素能抑制腫瘤細胞的生長，但對人絨癌細胞的抑制作用及其機制未見報道。 本研究對紫草素誘導人絨毛膜癌細胞凋亡的規(guī)律及其分子機制進行了一定的探討。研究發(fā)現(xiàn)，紫草素能夠激活細胞凋亡的信號通路，進而誘導細胞凋亡。凋亡過程與Caspase-3相關，并且MAPK家族成員的激活受到抑制。 方法：

2、 1、MTT法測定紫草素對絨癌細胞JEG-3、JAR增殖的半數(shù)抑制濃度。 2、光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化。 3、Hochest33258熒光染色法觀察凋亡細胞形態(tài)學變化。 4、流式細胞術PI單染、Annexin V/PI雙染檢測檢細胞凋亡。 5、Westem Blot檢測紫草素作用絨癌細胞后凋亡相關蛋白PARP、Caspase-3、p-ERK、p-JNK、p38、p-AKT、pSTAT3、AR的

3、表達。 結果： 紫草素對絨癌細胞JEG-3、JAR都具有明顯的生長抑制作用，其半數(shù)抑制濃度分別為JEG-3(ICso:6.3±0.6μM)，JAR(ICso:9.2±0.8μM)，抑制效果與紫草素作用時間、劑量呈正相關。而紫草素對人正常胎腎細胞HEK-293及人胎肝細胞L-02的抑制率不到1％。不同濃度的紫草素作用JEG-3細胞24小時可見明顯形態(tài)學變化：細胞變圓，部分細胞不再貼壁而成懸浮狀態(tài)，內(nèi)溶物凝集，透光性差，48

4、小時后細胞起泡，大量細胞懸浮，死亡，產(chǎn)生大量細胞碎片。Hochest33258熒光染色實驗發(fā)現(xiàn)紫草素能引起細胞核染色質(zhì)斷裂、邊集、濃縮，產(chǎn)生凋亡特征。PI單染流式細胞術分析結果出現(xiàn)亞二倍體峰，且隨著濃度和時間增加，峰值出現(xiàn)明顯變化，呈增加趨勢。Annexin- V/PI雙染結果顯示O、5、10(μM)紫草素作用JEG-3細胞12小時后，細胞凋亡率分別為7.3％、29.4％、48.8％。 為了闡明紫草素誘導絨癌細胞JEG-3凋亡的

5、相關信號轉導通路，我們檢測Caspase-3、PARP、 p-ERK、p-JNK、p38、p-AKT、pSTAT3、AR蛋白等的表達及活化情況。結果顯示紫草素能夠激活Caspase-3，進一步檢測Caspase-3的底物PARP蛋白，檢測到86KD的剪切片斷。此外，紫草素能夠下調(diào)AR表達，降低AKT、STAT3、ERK、JNK等的磷酸化水平。初步的作用機制研究表明，紫草素經(jīng)Caspase-3途徑誘導腫瘤細胞凋亡，抑制促細胞分裂原激活蛋白