長雙歧桿菌通過下調(diào)NLRP6炎癥小體表達(dá)抑制PI-IBS回腸粘膜免疫.pdf

1、目的：研究NLRP6炎癥小體是否參與PI-IBS發(fā)病,長雙歧桿菌干預(yù)是否對NLRP6炎癥小體信號通路有調(diào)節(jié)作用。
　　方法：將40只NIH小鼠隨機(jī)分為五組:2周正常對照組(NC-2W),感染后2周組(PI-2W),8周正常對照組(NC-8W),感染后8周組(PI-8W)和長雙歧桿菌干預(yù)組(PI-B)。采用旋毛蟲感染制造PI-IBS動物模型。NC-2W,PI-2W在旋毛蟲感染兩周后處死,NC-8W,PI-8W在感染后8周處死,PI-

2、B在感染八周后再長雙歧桿菌灌胃干預(yù)一周后處死,分別取出回腸末端組織,用免疫熒光標(biāo)記檢測NLRP6及其配體ASC、caspase-1的表達(dá)部位;采用western-blot方法檢測CD172a,NLRP6及其配體ASC、CARD8、caspase-1,下游細(xì)胞因子IL-18,IL-1β的表達(dá)情況。每只小鼠處死前均做AWR評分。
　　結(jié)果：
　　1、內(nèi)臟敏感性改變(AWR評分):PI-2W和PI-8W組AWR評分在40mmHg和

3、60mmHg壓力下,與其對照組(NC-2W,NC-8W)比較顯著升高(P<0.05);在20mmHg和80mmHg壓力下,較其對照組沒有顯著性差異(P>0.05)。PI-B組在40mmHg和60mmHg壓力下與PI-8W組比較,AWR評分顯著下降(P<0.05);在20mmHg和80mmHg壓力下,較PI-8W組沒有顯著性差異(P>0.05)。
　　2、CD172a的表達(dá)情況:PI-2W組與NC-2W組比較,CD172a的表達(dá)水平

4、顯著升高(P<0.01);PI-8W組與NC-8W組比較,CD172a的表達(dá)水平?jīng)]有顯著性差異(P>0.05);PI-B組與PI-8W組比較,CD172a的表達(dá)水平?jīng)]有顯著性差異(P>0.05)。
　　3、NLRP6及其重要配體表達(dá)部位:免疫熒光標(biāo)記檢測結(jié)果顯示,NLRP6及其配體ASC、caspase-1均只在回腸組織黏膜層表達(dá),其中在腸上皮中表達(dá)最豐富,且均為胞漿內(nèi)表達(dá),三者表達(dá)位置一致。
　　4、NLRP6炎癥小體相關(guān)

5、蛋白的表達(dá)情況
　　4.1NLRP6的表達(dá)情況:NLRP6在PI-2W組和PI-8W組的表達(dá)水平較其各自的正常對照組(NC-2W組和NC-8W組)均顯著升高(P<0.05);因為NC-2W和NC-8W組間沒有顯著性差異,所以可以將急性感染期和慢性感染期進(jìn)行比較,結(jié)果顯示NLRP6的表達(dá)水平在兩組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。而PI-B組NLRP6的表達(dá)水平較PI-8W組顯著下降(P<0.05)。
　　4.2NLRP6相

6、關(guān)蛋白的表達(dá)情況:CARD8、ASC和caspase-1在PI-2W組的表達(dá)水平均較NC-2W組顯著升高(P<0.05),PI-8W組較NC-8W組也均有顯著升高(P<0.05)。三者的表達(dá)水平在NC-8W組與NC-2W組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。PI-8W組和PI-2W組比較,三者的表達(dá)水平均沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。在PI-B組,CARD8、ASC和CASPASE-1的表達(dá)水平較PI-8W組均有顯著性下降(P<0.0

7、5)。
　　4.3NLRP6炎癥小體下游細(xì)胞因子的表達(dá)情況:IL-18、IL-1β在PI-2W組的表達(dá)水平與NC-2W組均顯著升高(P<0.05),但在PI-8W組僅IL-18較NC-8W組表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)。NC-8W組與NC-2W組比較,IL-18、IL-1β的表達(dá)水平無顯著差異(P>0.05)。IL-18在PI-8W組的表達(dá)水平較PI-2W組顯著下降(P<0.05),而IL-1β的表達(dá)水平在PI-8W組和PI-