二甲雙胍對(duì)大鼠NAFLD的作用及對(duì)肝細(xì)胞脂性凋亡PLA2-LPC通路的影響.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一類肝臟病理改變類似于酒精性脂肪肝而無(wú)飲酒史的慢性肝臟疾病，包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化等發(fā)展階段。二次打擊學(xué)說(shuō)是目前最為廣泛接受的發(fā)病機(jī)制。胰島素抵抗、氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過(guò)氧化作用形成了一個(gè)使肝細(xì)胞受到持續(xù)打擊的連續(xù)的破壞鏈。胰島素抵抗既是第一次打擊的源頭又是貫穿整個(gè)疾病發(fā)展的病理基礎(chǔ)，肝細(xì)胞脂性凋亡是NAFLD最鮮明的病理特點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)脂肪酸代謝途徑中PLA2/LPC激活是肝細(xì)胞走向凋

2、亡的關(guān)鍵步驟。因此，改善胰島素抵抗的治療有可能會(huì)阻止NAFLD的發(fā)生和發(fā)展。鹽酸二甲雙胍是目前唯一被美國(guó)FDA批準(zhǔn)可用于10歲以上兒童青少年2型糖尿病治療的藥物，它可以增加胰島素的敏感性。但在肝臟脂質(zhì)聚積的初始階段以及NAFLD形成以后，給予二甲雙胍治療，是否能減輕或改善肝臟的脂肪代謝、脂質(zhì)沉積，能否干擾PLA2/LPC通路，阻斷肝細(xì)胞脂性凋亡的發(fā)生，對(duì)NAFLD起到預(yù)防和治療作用，目前尚不清楚。本研究以高脂飲食的NAFLD大鼠為模型，

3、著重評(píng)估二甲雙胍在改善脂肪酸代謝中的作用以及它對(duì)肝細(xì)胞凋亡PLA2/LPC途徑的影響，為臨床預(yù)防和治療非酒精性脂肪性肝病提供新的方法。
　　 目的：通過(guò)觀察二甲雙胍干預(yù)和治療NAFLD大鼠的療效來(lái)研究其在脂肪酸代謝中的作用及其對(duì)肝細(xì)胞脂性凋亡PLA2/LPC途徑的影響。
　　 方法：⑴98只雄性SD大鼠，體質(zhì)量160～190 g，鼠齡4～6 wk。二甲雙胍預(yù)防試驗(yàn)：50只大鼠隨機(jī)分成以下4組：普通飲食組I(I組)12只、

4、高脂飲食組I(II組)12只、二甲雙胍組(III組)13只、葫蘆素組(IV組)13只，喂養(yǎng)10周。二甲雙胍治療試驗(yàn)：48只大鼠隨機(jī)分成以下4組：高脂飲食組II(V組)12只：高脂飲食喂養(yǎng)12周后繼續(xù)高脂喂養(yǎng)4周；高脂飲食+二甲雙胍組(VI組)12只：高脂飲食喂養(yǎng)12周后繼續(xù)高脂飲食+二甲雙胍喂養(yǎng)4周；普通飲食+二甲雙胍組(Ⅶ組)12只：高脂飲食喂養(yǎng)12周后改為普通飲食+二甲雙胍喂養(yǎng)4周；普通飲食組II(VIII組)：高脂飲食喂養(yǎng)12周后

5、改為普通飲食喂養(yǎng)4周，喂養(yǎng)結(jié)束同時(shí)處死。⑵測(cè)定大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、脂蛋白a(LPa)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)、游離脂肪酸(FFA)、溶血磷脂酰膽堿(LPC)，胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)、分泌型磷脂酶A2(sPLA2)，鈣非依賴性磷脂酶A2(iPLA2)、瘦素等指標(biāo)，在光鏡下觀察大鼠肝臟形

6、態(tài)學(xué)改變，在透射電鏡下觀察肝細(xì)胞、線粒體及其他細(xì)胞外基質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)變化。所有資料采用SPSS12.0軟件分析。計(jì)量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩兩比較采用最小顯著性差異法LSD方法。非正態(tài)分布資料(FINS，HOMA-IR，IAI，F(xiàn)PG/FINS)，經(jīng)開(kāi)平方根轉(zhuǎn)換成正態(tài)分布資料后，再做統(tǒng)計(jì)。計(jì)數(shù)資料的比較用卡方檢驗(yàn)，結(jié)果以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：①在

7、高脂飲食同時(shí)給予二甲雙胍干預(yù)，可以明顯減輕大鼠的體重、肝重，血清ALT、TG、LDL、FFA、LPC、sPLA2、瘦素、空腹血清胰島素、胰島素抵抗指數(shù)、肝臟TG、CHO、脂肪變性程度都明顯低于高脂飲食組(P<0.05)。②在高脂飲食同時(shí)給予葫蘆素片治療，其降低血清ALT的作用明顯，但對(duì)血脂代謝指標(biāo)(TG、CHO、LDL)，胰島素抵抗指標(biāo)(空腹血清胰島素、HOMA-IR、IAI)，血清FFA、LPC、瘦素，肝臟TG、CHO的改善及減輕肝細(xì)

8、胞脂肪變性的作用，不如二甲雙胍。③NAFLD形成以后，給予普通飲食+二甲雙胍治療，大鼠的肝重、體重、血清ALT、TG、CHO、LPa、LDL、HOMA-IR、FFA、LPC、sPLA2、瘦素、肝TG、CHO、脂肪變性程度均明顯低于繼續(xù)高脂飲食組；給予普通飲食治療，大鼠的體重、肝重、LPC、瘦素、肝TG、CHO、脂肪變性程度也明顯低于繼續(xù)高脂飲食組；而單純二甲雙胍治療組(繼續(xù)高脂飲食+二甲雙胍治療)大鼠的體重、血清ALT、TG、CHO顯著

9、低于繼續(xù)高脂飲食組，但降低大鼠肝重、LPC、瘦素、減輕肝細(xì)胞脂肪變性的作用不如普通飲食+二甲雙胍及普通飲食治療。④二甲雙胍治療后，sPLA2基因表達(dá)明顯下降，血清LPC水平亦明顯降低，二甲雙胍可能是通過(guò)調(diào)節(jié)sPLA2基因表達(dá)，降低血清LPC，減輕炎癥反應(yīng)來(lái)發(fā)揮預(yù)防和治療NAFLD的作用。
　　 結(jié)論：⑴二甲雙胍對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)大鼠NAFLD的發(fā)生有預(yù)防作用，與傳統(tǒng)護(hù)肝藥葫蘆素片相比，其效果更明顯，特別在改善血脂代謝及胰島素抵抗方面