大鼠下頜骨成骨細(xì)胞對二甲雙胍及普伐他汀的轉(zhuǎn)運(yùn).pdf

1、糖尿病和骨質(zhì)疏松癥是影響人工種植牙修復(fù)的主要的系統(tǒng)性疾病。它們通過引起種植體周圍的一系列的病理變化，進(jìn)而影響骨組織的修復(fù)和重建，降低種植牙的成功率。二甲雙胍不僅能夠降低血糖，而且對種植體周圍骨整合有促進(jìn)作用；抗高脂血癥藥物普伐他汀，可以有效地治療骨質(zhì)疏松癥，是目前發(fā)現(xiàn)的惟一能夠既促進(jìn)骨形成，又抑制骨吸收的藥物。目前，在種植體周圍局部給藥成為研究的重點，特別是劉洪臣提出的人工種植體給藥系統(tǒng)一即通過種植體與骨的接觸，使藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到局部乃至全身

2、，從而達(dá)到更好的治療效果。為此，我們需要了解骨組織細(xì)胞對兩種藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)能力.本實驗通過觀察兩種藥物在成骨細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)，探討其可能的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，為人工種植牙給藥提供實驗依據(jù)。
　　 第一部分大鼠下頜骨成骨細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)transwell模型的建立
　　 目的：建立大鼠下頜骨成骨細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)transwell模型。
　　 方法：分離培養(yǎng)大鼠下頜骨成骨細(xì)胞，并接種在transwell上室底部的聚碳酸脂膜上，光學(xué)顯微鏡觀察其

3、生長情況，掃描和透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞連接情況，跨膜電阻及熒光素鈉通透實驗檢測細(xì)胞的屏障功能。
　　 結(jié)果：成功培養(yǎng)并接種了大鼠下頜骨成骨細(xì)胞于聚碳酸脂膜上；光學(xué)顯微鏡觀察，大鼠下頜骨成骨細(xì)胞(1×105/ml)接種2周后，細(xì)胞已完全匯合，連接緊密，并呈復(fù)層生長；掃描和透射電子顯微鏡顯示，細(xì)胞間呈縫隙連接；細(xì)胞屏障功能檢測，跨膜電阻隨時間的增加而增加，第2周時達(dá)到最大(88.65±7.33)Ω/cm2，并至少持續(xù)到接種后3周；熒

4、光素鈉通透性檢測結(jié)果顯示，孵育30min只有0.17％的熒光素鈉從transwell上室到達(dá)下室。
　　 結(jié)論：應(yīng)用transwell小室可以建立體外大鼠下頜骨成骨細(xì)胞復(fù)層生長的模型，并可用于藥物細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究。
　　 第二部分大鼠下頜骨來源的成骨細(xì)胞對二甲雙胍的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)
　　 目的：檢測成骨細(xì)胞對二甲雙胍的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，研究其可能的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，探討人工種植牙給藥的條件及可行性。
　　 方法：高效液相色

5、譜法測定轉(zhuǎn)入及轉(zhuǎn)出成骨細(xì)胞二甲雙胍的量，同時考察時間、藥物濃度、溫度，pH值、有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Octs)抑制劑西米替丁、二甲雙胍類似物苯乙雙胍以及P-糖蛋白(P-gp)抑制劑維拉帕米對二甲雙胍轉(zhuǎn)運(yùn)的影響；免疫組化和RT-PCR檢測Octs的表達(dá)，Western-blot檢測二甲雙胍對成骨細(xì)胞Octl轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：二甲雙胍能夠在成骨細(xì)胞上進(jìn)行跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，且隨著轉(zhuǎn)運(yùn)時間和藥物濃度的增加而增加，并可達(dá)到飽和；一定

6、范圍內(nèi)提高溫度和pH值可以促進(jìn)二甲雙胍的轉(zhuǎn)運(yùn)；西米替丁和苯乙雙胍對二甲雙胍轉(zhuǎn)運(yùn)有明顯抑制作用，而維拉帕米則對轉(zhuǎn)運(yùn)有明顯的促進(jìn)作用；Octl廣泛表達(dá)在成骨細(xì)胞的胞膜及胞漿中，而Oct2無表達(dá)；二甲雙胍在不同濃度及不同給藥時間均能夠上調(diào)Octl的表達(dá)，但各組間無明顯差別。
　　 結(jié)論：大鼠下頜骨來源成骨細(xì)胞能夠?qū)Χ纂p胍進(jìn)行跨膜運(yùn)輸，且跨膜運(yùn)輸是通過Octl為載體介導(dǎo)的協(xié)助擴(kuò)散及P-gp為載體介導(dǎo)的主動轉(zhuǎn)運(yùn)的過程。
　　 第

7、三部分大鼠下頜骨來源的成骨細(xì)胞對普伐他汀的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)
　　 目的：檢測成骨細(xì)胞對普伐他汀的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，研究其可能的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，探討人工種植牙給藥的條件及可行性。
　　 方法：高效液相色譜法測定轉(zhuǎn)入及轉(zhuǎn)出成骨細(xì)胞普伐他汀的量，同時考察時間、藥物濃度、溫度、pH值、他汀類藥物辛伐他汀和洛伐他汀以及P-糖蛋白(P-gp)抑制劑維拉帕米對普伐他汀轉(zhuǎn)運(yùn)的影響；免疫組化檢測Oatpl的表達(dá)，Western-blot檢測普伐他汀對成骨細(xì)胞O

8、atpl轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：普伐他汀能夠在成骨細(xì)胞上進(jìn)行跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，且隨著轉(zhuǎn)運(yùn)時間和藥物濃度的增加而增加，并可達(dá)到飽和；一定范圍內(nèi)提高溫度和pH值可以促進(jìn)普伐他汀的轉(zhuǎn)運(yùn)；辛伐他汀和洛伐他汀對普伐他汀轉(zhuǎn)運(yùn)有明顯抑制作用，而維拉帕米則對轉(zhuǎn)運(yùn)無明顯作用；Oatpl廣泛表達(dá)在成骨細(xì)胞的胞膜及胞漿中；普伐他汀在不同濃度及不同給藥時間均能夠上調(diào)Oatpl的表達(dá)，但各組間無明顯差別。
　　 結(jié)論：成骨細(xì)胞能夠?qū)ζ辗ニ∵M(jìn)行