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文檔簡介
1、目的:觀察高糖條件培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞(Mesangial Cells,MCs)氧化應(yīng)激水平以及二甲雙胍(Metformin,Met)對其氧化應(yīng)激的影響,探討二甲雙胍保護(hù)腎臟機(jī)制。
方法:將大鼠GMCs置于體外培養(yǎng),分組如下:
①正常對照(NG)組:DMEM液(Glu5.6mmol/L)
?、诟咛?HG)組:DMEM液(Glu25mmol/L)
?、鄱纂p胍1組(Met1組):HG+Met(0.5
2、mmol/L)
?、芏纂p胍2組(Met2組):HG+met(1.0mmol/L)
⑤二甲雙胍3組(Met3組):HG+met(2.0mmol/L)
不同濃度二甲雙胍先干預(yù)24h,每組細(xì)胞培養(yǎng)48h后收集細(xì)胞和上清培養(yǎng)液,各個檢測指標(biāo)均設(shè)6個重復(fù)組。MCs內(nèi)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate,NADPH)氧化酶亞基 p22ph
3、ox和p47phox mRNA表達(dá)采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-RCR)方法測定,上清液中脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性采用比色法測定。
結(jié)果:
?。?)每組MCs上清液中MDA含量的比較
與 NC組相比,經(jīng)高糖刺激后的 MCs上清液中MDA含量明顯升高(pt;0.05);與HG組比
4、較,各二甲雙胍組MCs上清液MDA含量均減少(Pt;0.05)。
?。?)每組MCs上清液中SOD活性的比較
與 NC組相比,經(jīng)高糖刺激后的 MCs上清液中SOD活性明顯下降(pt;0.05);與HG組比較,各二甲雙胍組上清液 SOD活性均有不同程度升高,但各二甲雙胍組SOD活性仍低于NC組。
(3)每組MCs P22phox表達(dá)的比較
與NC組相比,經(jīng)高糖刺激后的MCs P22phox表達(dá)顯著增多
5、(pt;0.05);與HG組比較,各二甲雙胍組上清液P22phox表達(dá)減少,但各二甲雙胍組P22phox表達(dá)高于NC組。
?。?)每組MCs P47phox表達(dá)的比較
與NC組相比,經(jīng)高糖刺激后的MCs P47phox表達(dá)顯著增多(pt;0.05);與HG組比較,各二甲雙胍組上清液P47phox表達(dá)減少,但各二甲雙胍組P47phox表達(dá)高于NC組。
結(jié)論:
1.高糖刺激后大鼠MCs上清液中MDA含量
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