RNA干擾在人胃癌細(xì)胞SGC7901中抑制survivin基因的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究小干擾RNA對(duì)人胃癌SGC7901細(xì)胞survivin表達(dá)及細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。 方法：采用體外培養(yǎng)胃癌SGC7901細(xì)胞，利用lipofectaminen<'TM>2000將survivin特異性小干擾RNA轉(zhuǎn)染給胃癌SGC7901細(xì)胞來(lái)敲除survivin的表達(dá)。用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和Western blotting測(cè)定survivinmRNA和蛋白的表達(dá)。甲基噻唑基四唑(MTT)用來(lái)分析不同濃度

2、、不同時(shí)間點(diǎn)survivin小干擾RNA對(duì)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)survivin siRNA對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：經(jīng)轉(zhuǎn)染siRNA后，RT-PCR結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染survivin siRNA組，轉(zhuǎn)染non-silencing siRNA組以及未處理組survivin基因mRNA表達(dá)強(qiáng)度分別為(29.4±2.5)﹪，(50.3±3.2)﹪和(53.1±3.1)﹪，轉(zhuǎn)染survivin siRNA組的SG

3、C7901細(xì)胞survivin基因mRNA的表達(dá)水平和兩對(duì)照組相比顯著下降(p<0.01)；轉(zhuǎn)染survivin siRNA后48h survivin mRNA抑制率為(44.52±4.1)﹪； Western blotting 結(jié)論：各組細(xì)胞survivin蛋白表達(dá)強(qiáng)度分別為(21.3±2.4)﹪，(31.0±3.6)﹪和(35.6±2.0)﹪，轉(zhuǎn)染survivin siRNA組的SGC7901細(xì)胞survivin基因蛋白表達(dá)

4、水平和兩對(duì)照組相比顯著下降(p<0.01)，轉(zhuǎn)染survivin特異siRNA后48h蛋白抑制率為(40.17±5.71)﹪，說(shuō)明小干擾RNA能有效地抑制胃癌SGC7901中survivin表達(dá)。MTT檢測(cè)顯示：用不同濃度，不同時(shí)間轉(zhuǎn)染后，發(fā)現(xiàn)100nmol 48h抑制率最顯著。流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期及凋亡率測(cè)定結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染survivin siRNA后，SGC7901陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)G<,0>/G<,1>期細(xì)胞增多(38.2﹪→88.6﹪

5、)，在S期和G2/M期細(xì)胞數(shù)下降，并在轉(zhuǎn)染48 h后，凋亡率升高。轉(zhuǎn)染survivin siRNA組凋亡率明顯高于轉(zhuǎn)染non-silencingsiRNA組以及未處理組(P<0.01)。結(jié)論：survivin在胃癌SGC7901細(xì)胞中高表達(dá)。轉(zhuǎn)染survivin siRNA后，survivin表達(dá)顯著受到抑制；下調(diào)survivin后，可以在體外顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，抑制survivin的表達(dá)可以誘導(dǎo)胃癌SGC?901細(xì)胞凋亡。surv