MiR-200a靶向CTNNB1抑制SGC7901人胃癌細胞生長侵襲能力的體外研究.pdf

1、微RNA(microRNAs；miRNA)是一類長度約為21～23nt的單鏈非編碼小分子RNA，廣泛存在于真核生物體內，通過miRNA的“種子”序列與靶基因3'非翻譯區(qū)特異性結合來抑制蛋白翻譯或導致靶mRNA降解的形式調節(jié)轉錄后的基因表達。最近研究表明，miRNA通過調節(jié)信號通路的活性參與多種腫瘤的形成、發(fā)展、侵襲轉移及增殖等，特別是上皮來源的腫瘤。miRNA和Wnt/β-catenin信號通路的相互作用關系成為近年研究的熱點。

2、　　Wnt/β-catenin信號通路的異常激活使細胞獲得無限增殖的能力，導致腫瘤的形成。Wnt/β-catenin信號通路的活性紊亂是許多上皮來源惡性腫瘤的共同特征，在這些腫瘤中，信號通路的主要成分β-catenin或多蛋白降解復合物(APC、AXIN和GSK3β)的突變等，導致了β-catenin在細胞內的聚集及Wnt/β-catenin信號通路的激活。
　　近年來人們發(fā)現許多新的基因參與Wnt/β-catenin信號通路活性

3、的調控，目前這方面研究主要集中在miRNA在調控wnt/β-catenin通路中的作用。一些miRNAs作為癌基因或抑癌基因參與Wnt/β-catenin信號通路的調控，其中，miR-200a可以抑制β-catenin介導的轉錄，但其作用機制目前尚不明確。
　　本實驗中，我們用miR-200a mimics、miR-200a inhibitor上調或下調miR-200a的表達，觀察胃腺癌細胞系SGC7901中Wnt/β-caten

4、in信號通路活性出現的相應改變。應用TOP/FOP熒光素酶試驗檢測Wnt/β-catenin通路轉錄活性；3'UTR熒光素酶報告實驗驗證CTNNB1(β-catenin的編碼基因)為miR-200a的直接作用靶點；增殖、周期、遷移、侵襲等試驗驗證miR-200a的生物學功能；蛋白印跡法驗證miR-200a在上皮間質轉化中的作用。
　　實驗結果顯示，miR-200a通過調控Wnt/β-catenin信號通路及下游基因影響SGC790