aPKC-ι作為人類肝癌治療新靶點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】aPKC-ι作為一種極化調(diào)節(jié)蛋白，在肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移中起著重要作用。本研究為了證實(shí)aPKC-ι在信號(hào)通路中可以與下游適配體PAR6相互作用，及硫代蘋果酸金鈉（Aurothiomalate，ATM）可對(duì)二者結(jié)合起劑量依賴性抑制作用。
　　 【方法】本研究通過化學(xué)合成aPKC-ι基因（1-339bp）和PAR6基因全長，分別亞克隆于原核表達(dá)載體，構(gòu)建pET-15b/aPKC-ι和pGEX-4t-3/PAR6

2、重組質(zhì)粒。質(zhì)粒擴(kuò)增后，分別轉(zhuǎn)化E coli.BL21(DE3)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá)后，行GST pull down驗(yàn)證蛋白aPKC-ι與PAR6之間的相互作用，及ATM對(duì)其結(jié)合的抑制作用。
　　 【結(jié)果】成功構(gòu)建了重組原核質(zhì)粒蛋白表達(dá)系統(tǒng)。GST pull down結(jié)果分析證實(shí)Par6與aPKC-ι的PB1結(jié)構(gòu)域存在直接的結(jié)合關(guān)系。硫代蘋果酸金鈉（ATM）可以抑制二者直接結(jié)合，且隨抑制劑ATM濃度的增大，其二者結(jié)合愈弱。經(jīng)W

3、estern Blot的半定量分析，將IOD值標(biāo)準(zhǔn)化，確定不加入ATM時(shí)二者的結(jié)合率為100％，則加入10 μM ATM時(shí)二者的結(jié)合率為63.8％，加入50 μM ATM時(shí)二者的結(jié)合率為32.7％。
　　 【結(jié)論】在aPKC-ι信號(hào)通路中，aPKC-ι與Par6直接結(jié)合為極化復(fù)合物，與肝癌的腫瘤生長及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。金化合物ATM可以抑制二者結(jié)合，中斷信號(hào)通路。aPKC-ι可能成為肝細(xì)胞肝癌治療新靶點(diǎn)，為肝癌治療提供新途徑、新