以端粒酶為靶點的AD治療策略的體外實驗研究.pdf

1、中山大學博士學位論文以端粒酶為靶點的AD治療策略的體外實驗研究姓名：孔令平申請學位級別：博士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學指導教師：汪華僑20090530通過提高端粒酶活性延緩細胞的衰老?；谝陨习l(fā)現(xiàn)，本課題利用已構建的hTERT基因重組腺病毒載體(AdhTERT)轉(zhuǎn)染人胚胎皮質(zhì)神經(jīng)元，觀察外源性hTERT是否對Afl2535誘導的人胚胎皮質(zhì)神經(jīng)元損傷具有保護作用及可能機制。然后利用端粒酶活性陽性的人神經(jīng)母細胞瘤細胞系SH—SY5Y構建SA

2、D胞質(zhì)雜交細胞，通過檢測它們在培養(yǎng)過程中線粒體形態(tài)結(jié)構和功能的變化，此變化對內(nèi)源性端粒酶活性的影響以及雌激素干預后對hTERTmRNA表達的影響，以探討端粒酶在氧化應激狀態(tài)中可能的作用和影響。本課題的完成將為探索以端粒酶為靶點的AD基因治療策略提供基礎性資料。材料與方法1端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶對Apzs3s誘導的人胚胎皮質(zhì)神經(jīng)元損傷的神經(jīng)保護作用分離和培養(yǎng)12“20周齡人胚胎皮質(zhì)神經(jīng)元，AdhTERT基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染，免疫細胞化學法檢測hTE

3、RT的表達。轉(zhuǎn)染后第3d天給予10I_tmol／LA陀s3s作用24h，MTT檢測細胞活力，熒光探針DCFHDA檢測細胞內(nèi)ROS水平，GSH檢測試劑盒(比色法)測定細胞勻漿中GSH含量。2po細胞和SAD胞質(zhì)雜交細胞的構建與鑒定采用sHSY5Y細胞作為母細胞進行po細胞的構建，在培養(yǎng)基中加入51tg／ml和75ttg／ml溴化乙錠長期作用SHSY5Y，第10周左右開始行透射電鏡觀察線粒體形態(tài)變化和用PCR法擴增mtDNA編碼的目的基因細