啟東肝癌中AKR1C2基因的突變、表達(dá)特征及其致癌機(jī)制研究.pdf

1、南京師范大學(xué)博士學(xué)位論文啟東肝癌中AKR1C2基因的突變、表達(dá)特征及其致癌機(jī)制研究姓名：陸東東申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：張錫然20031101啟東肝癌中A K R l C 2 基因的突變、表達(dá)特征及其致癌機(jī)制研究陸東東： 張錫然( 導(dǎo)師)南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院中文摘要本文以A K R 。C 。( A 1 d o —K e t o R e d u c t a s eI C I I ) 序列( A B 0 2 1 6 5

2、 ) 為信息探針，利用生物信息學(xué)同源篩選的方法，拚接其全長(zhǎng)序列，對(duì)其結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行預(yù)測(cè)。以乙型肝炎病毒( H B V ) 感染、黃曲霉毒素B ，( A F B 。) 污染、P 5 3 基因高度突變?yōu)橹饕虻膯|高發(fā)區(qū)肝癌患者( 共1 7 0 例) 及啟東肝癌細(xì)胞株Q G Y 7 7 0 3 為研究對(duì)象，以A K R ．C 。為目標(biāo)基因，參照生物信息學(xué)模擬分析結(jié)果，借助分子細(xì)胞生物學(xué)手段，如R T - P C R 、N o r t h e

3、r nb l o t 、S o u t h e r nb l o t 、w e s t e r nb l o t 、5 ’、3 ’一R A C E 、P C R —S S C P 、直接序列分析、免疫組化、原位雜交、多克隆抗體的制備、真核轉(zhuǎn)染、基因框移突變的構(gòu)建、體內(nèi)外致瘤能力測(cè)定、基因表達(dá)芯片、反義基因轉(zhuǎn)染、免疫共沉淀、酵母雙雜交等，對(duì)A K R ．C ?；蛟趩|肝癌及其癌旁組織中的突變、表達(dá)特征及其致肝癌機(jī)制進(jìn)行研究。本研究中R

4、A C E 分析結(jié)果顯示：A K R ，C 。c D N A 全長(zhǎng)序列為1 8 6 5 b p ，5 7 非編碼序列為2 5 3 b p ，3 ’非編碼序列為6 4 0 b p ，起始密碼子為A T G ，終止密碼子為T A A ，開放閱讀框( O R F ) 為9 7 2 b p 。所擴(kuò)增的長(zhǎng)度為的9 8 5 b p 的A K R 。C 。基因的片段( 以o R F設(shè)計(jì)引物) ，用同位索摻入標(biāo)記做為雜交探針，與印有3 6 種人類組織m

5、 R N A 的M T N膜進(jìn)行N o r t h e r n 雜交。結(jié)果顯示人類A K R 。C 。基因的表達(dá)譜：心、胎盤、直腸、肝、骨骼肌、卵巢、前列腺、大腸、盲腸、胸腺、睪丸、附睪、輸卵管、盲腸、鼻、乳房、胃組織中A K R 。C ：中均檢出一種大約為1 ．9 k b 的剪接本，在毛發(fā)組織中檢出一種大約為1 ．2 k b 的剪接本。在肝臟、前列腺、大腸、盲腸、附睪、輸卵管中表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它組織，即存在一定的組織表達(dá)特異性。迭加A