DADS對(duì)人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H446增殖和凋亡的影響.pdf

1、研究目的：
　　探討二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)體外抑制人肺癌細(xì)胞株NCI-H446細(xì)胞增殖作用、誘導(dǎo)凋亡作用及可能的分子機(jī)理。
　　研究方法：
　　(1)采用MTT、細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞活力檢測(cè)DADS對(duì)體外培養(yǎng)的人肺癌 H446細(xì)胞的抑制增殖作用;
　　(2)倒置顯微鏡,普通光學(xué)顯微鏡,熒光顯微鏡觀察DADS對(duì)體外培養(yǎng)的人肺癌 H446細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;
　　(3)DNA瓊脂糖

2、凝膠電泳實(shí)驗(yàn)觀察凋亡條帶;
　　(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)DADS對(duì)H446細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯作用和細(xì)胞凋亡率的影響;
　　(5)激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)DADS對(duì) H446細(xì)胞內(nèi)Ca2+變化的影響;
　　(6)利用免疫組織化學(xué)(S-P法)檢測(cè)用藥前后H446細(xì)胞內(nèi)Bcl-2和PCNA蛋白表達(dá)的變化,初步探討DADS在體外對(duì)人肺癌H446細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用的可能機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　(1)MTT結(jié)果顯示:DADS作用

3、 H446細(xì)胞后,明顯抑制細(xì)胞增殖且抑制率呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性關(guān)系;細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果表明:DADS作用 H446細(xì)胞后呈濃度依賴性延長(zhǎng)細(xì)胞群體倍增時(shí)間。
　　(2)形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示:DADS處理H446細(xì)胞后,作用早期細(xì)胞即可出現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)變化。
　　(3)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示:DADS可誘導(dǎo)H446細(xì)胞產(chǎn)生凋亡細(xì)胞的典型梯狀條帶。
　　(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示:DADS處理H446細(xì)胞后Go/G1期細(xì)胞比例下降,

4、而G2/M期細(xì)胞比例則顯著增加;藥物誘導(dǎo)組細(xì)胞凋亡率明顯高于非誘導(dǎo)組。
　　(5)激光共聚焦結(jié)果顯示:DADS處理H446細(xì)胞后,處理組熒光強(qiáng)度明顯高于未處理組,提示DADS促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平升高。
　　(6)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:DADS處理細(xì)胞48h后,BCL-2表達(dá)減弱,PCNA蛋白表達(dá)下調(diào)。
　　結(jié)論：
　　1.DADS對(duì)人小細(xì)胞肺癌H446細(xì)胞株具有抗增殖作用,且與藥物濃度及作用時(shí)間相關(guān)。