肺康飲含藥血清對(duì)人肺癌細(xì)胞(NC-H446)細(xì)胞增殖凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究肺康飲的藥物血清對(duì)人肺癌細(xì)胞（NC-H446）形態(tài)學(xué)、增殖與細(xì)胞周期和凋亡率，及其相關(guān)基因B細(xì)胞白血病/淋巴瘤-2基因（bcl-2）和p53蛋白的影響，探討肺康飲治療肺癌的作用及機(jī)制。
　　 方法：研究對(duì)象由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞室提供的人非小細(xì)胞肺癌NC-H446細(xì)胞株，本院實(shí)驗(yàn)中心細(xì)胞室保存。通過給正常大鼠灌胃制備肺康飲的藥物血清，設(shè)為含藥血清組，正常大鼠血清設(shè)為空白血清組，研究不同血清對(duì)肺癌細(xì)胞的影響。
　　

2、 （1）制作肺癌細(xì)胞的超薄切片，在透射電鏡下觀察肺癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變；
　　 （2）采用咪哇比色分析法（MTT）檢測(cè)不同濃度藥物血清對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的影響；
　　 （3）采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物血清對(duì)肺癌細(xì)胞周期和凋亡率的影響
　　 （4）應(yīng)用免疫組化方法，檢測(cè)p53、bcl-2蛋白表達(dá)情況。所有數(shù)據(jù)均用SPSS12軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果：
　　 1.培養(yǎng)NC-H446人肺癌細(xì)胞電鏡觀察，細(xì)

3、胞核、核膜清晰可見，胞質(zhì)內(nèi)可見Mi、rER、Ri結(jié)構(gòu)，細(xì)胞表面Vi。藥物血清處理24 h，細(xì)胞在電鏡下可見細(xì)胞核染色質(zhì)濃淡不均，異染色質(zhì)凝聚在核周邊，可見核仁，細(xì)胞膜起皺呈出芽狀。藥物血清處理48 h，可見凋亡小體形成，小體內(nèi)Mi、rER、外膜清晰，形成多個(gè)凋亡小體。
　　 2.與空白血清組比較，肺康飲藥物血清作用12h既有凋亡峰（7.43％）出現(xiàn)，24h達(dá)高峰為26.10％，而對(duì)照組僅為6.71％，藥物血清作用后，G0/G1細(xì)

4、胞明顯減少， S期細(xì)胞增多5％、10％和15％濃度組的含藥血清對(duì)肺癌細(xì)胞的增殖均有明顯的抑制作用（P<0.05），其中10％含藥血清組的抑制率顯著強(qiáng)于5％含藥血清組（P<0.05），但15％含藥血清組與10％含藥血清組比較無顯著性差異（P>0.05）
　　 3.與空白血清組比較，含藥血清組肺癌細(xì)胞周期縮短和凋亡率明顯增高，其差異具有極顯著性（P<0.01）。
　　 4.免疫細(xì)胞化學(xué)研究結(jié)果：p53主要定位在細(xì)胞核，呈棕黃

5、色顆粒，部分細(xì)胞漿也有淡染，中藥組呈強(qiáng)陽(yáng)性。bcl-2主要表現(xiàn)為胞漿著色呈棕黃色顆粒，中藥組反應(yīng)強(qiáng)度下降。而空白對(duì)照組未見陽(yáng)性表達(dá)。
　　 5.流式細(xì)胞儀分析結(jié)果：p53、bcl-2在NC-H446人肺癌細(xì)胞株中都有不同程度的表達(dá)，藥物血清作用后，p53表達(dá)增強(qiáng)，bcl-2表達(dá)降低，隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，表達(dá)變化增強(qiáng)。
　　 結(jié)論：
　　 1.肺康飲藥物血清具有抑制人肺癌（NC-H446）細(xì)胞株增殖作用。