白細(xì)胞介素15基因克隆、改型及其在NCI-H446細(xì)胞中的表達.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文白細(xì)胞介素15基因克隆、改型及其在NCIH446細(xì)胞中的表達姓名：張征崢申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：王潤田20040301中文摘要因子基因治療腫瘤的誘人前景。ILl5是1994年Grabstein等發(fā)現(xiàn)的一種新的細(xì)胞因子。眾所周知，NK細(xì)胞能廣譜的殺傷腫瘤細(xì)胞，CD8T細(xì)胞能特異地殺傷腫瘤細(xì)胞，而IL15恰能促進這兩種細(xì)胞的增殖，提高它們殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。因此，激起了人們探索用IL一15對腫瘤

2、進行免疫治療的濃厚興趣。IL一15mRNA組織分布極為廣泛，可見于心、肺、腎、胎盤及骨骼肌。另外，單核／巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞及骨髓基質(zhì)細(xì)胞中也都有不同程度的IL15mRNA的表達。但是，研究發(fā)現(xiàn)，IL15的分泌受到多種因素的調(diào)控。其中，IL15的長信號肽是影響IL—15蛋白分泌的主要因素，而以lL2信號肽替代IL15信號肽以后，有可能會促進IL15蛋白的分泌。因此，本研究擬用基因拼接的方法將TL2信號肽(IL一2s

3、p)基因替代1L15信號肽(IL】5sp)基因，構(gòu)建成改型的IL15基因，將其插入真核表達載體，轉(zhuǎn)染小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，為研究IL—15細(xì)胞因子的腫瘤基因治療奠定基礎(chǔ)。方法：以pClIL15為模板進行PCR，以不同的上下游引物分別擴增得到包括其信號肽在內(nèi)的人IL，15cDNA全長基因片段(F，，。DN。)和無信號肽的IL15成熟肽基因片段(FIL15mp)；以pcDNA3一IL2為模板進行PCR，擴增得到人IL2信號肽基因片段(FIL2sp