綠茶提取物EGCG對(duì)人肝癌細(xì)胞株體內(nèi)外增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)和裸鼠皮下移植人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，觀察綠茶提取物EGCG單體對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721體內(nèi)外增殖、凋亡的影響，并探討可能的作用機(jī)制。擬為綠茶提取物用于臨床肝癌治療提供理論依據(jù)，也可能為肝癌治療提供新的思路和新的方法。 方法： 1.體外復(fù)蘇、培養(yǎng)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞并采用不同濃度的EGCG單體溶液對(duì)其進(jìn)行干預(yù)。將對(duì)數(shù)生長期的人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，以3.6×103/孔的密度接

2、種于96孔板，待細(xì)胞貼壁后加入EGCG單體溶液，使EGCG單體終濃度為10μg/ml、40μg/ml、80μg/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，分別于24h、48h、72h用。MTT法觀測EGCG單體溶液對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖能力的影響，按公式：抑制率(inhibition ratio，IR)=[1-(實(shí)驗(yàn)組平均A570值-空白組A570)/(對(duì)照組平均A570值-空白組A570)]×100％計(jì)算IR；將對(duì)數(shù)生長期的人肝癌SMMC-7721

3、細(xì)胞，以2.7×104/孔的密度接種于24孔板，待細(xì)胞貼壁后分別加入EGCG單體溶液，使EGCG單體終濃度為10μg/ml、40μg/ml、80μg/ml，繼續(xù)培養(yǎng)72h，用免疫細(xì)胞化學(xué)法結(jié)合圖象分析技術(shù)檢測人肝癌SMMC-7721細(xì)胞中Ki67的表達(dá)變化；將對(duì)數(shù)生長期的人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，以5.4×105/孔的密度接種于6孔板，待細(xì)胞貼壁后分別加入EGCG單體溶液，使EGCG單體終濃度為10μg/ml、40μg/ml、80μ

4、g/ml，繼續(xù)培養(yǎng)48h，用流式細(xì)胞儀Annexin V-FITC/PI法檢測EGCG單體溶液對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞凋亡的影響。 2.將對(duì)數(shù)生長期的人肝癌SMMC-7721細(xì)胞密度調(diào)整為1.5×107/ml，以每鼠0.2ml接種于裸鼠腋窩皮下。待皮下移植瘤形成后，將裸鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每天分別給予EGCG單體溶液50mg/kg只灌胃和生理鹽水灌胃，3周后瘤塊離體稱重。按公式抑瘤率=(1-實(shí)驗(yàn)組瘤重/對(duì)照組瘤重)×

5、100％計(jì)算抑瘤率；用免疫組織化學(xué)法檢測移植瘤中人肝癌SMMC-7721細(xì)胞Ki67的表達(dá)變化；用TUNEL法檢測移植瘤中人肝癌SMMC-7721細(xì)胞凋亡的情況。 結(jié)果： 1.肝癌細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在EGCG單體溶液的作用下，人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖能力明顯受到抑制(P<0.05)，并表現(xiàn)出量效和時(shí)效關(guān)系，Ki67表達(dá)水平下調(diào)(P<0.05)，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡明顯增加(P<0.05)。 2.動(dòng)物

6、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組裸鼠經(jīng)EGCG單體溶液灌胃后，皮下移植瘤體積、重量明顯小于對(duì)照組，抑瘤率為30.13％±5.17％，實(shí)驗(yàn)組移植瘤中人肝癌SMMC-7721細(xì)胞Ki67表達(dá)水平下調(diào)(P<0.05)，TUNEL法檢測實(shí)驗(yàn)組移植瘤中人肝癌SMMC-7721細(xì)胞凋亡明顯多于對(duì)照組(P<0.05)。 結(jié)論： 1.綠茶提取物EGCG單體對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞體外增殖具有抑制作用，并可抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞中