甲戊肝炎病毒重組抗原的表達(dá)、純化和免疫原性鑒定.pdf

1、甲肝病毒(Hepatitis A virus，HAV)和戊肝病毒是腸道傳播的肝炎病毒。兩種都是無包膜的正鏈小RNA病毒。HAV主要感染兒童，但隨著年齡增加，一旦感染，肝炎癥狀會(huì)更嚴(yán)重。戊肝暴發(fā)主要發(fā)生在許多發(fā)展中國家，導(dǎo)致數(shù)萬人感染。在孕婦患者中，戊肝致死率較高，可達(dá)20％。此外，HAV和HEV從流行病學(xué)到臨床癥狀都很相似，主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行鑒別。已有文獻(xiàn)報(bào)道因飲用了被HAV和HEV污染的水而同時(shí)感染甲肝和戊肝的病例。 本論

2、文主要研究了HAV vp1和HEV ORF2編碼的抗原片斷形成嵌合類病毒顆粒的免疫原性。將HAV vp1(aa 24～171)與HEV ORF2(aa 431～615)N端相連，形成重組抗原AEAg342或與ORF2C端相連，形成EAAg342重組抗原。將上訴兩種嵌合抗原基因插入表達(dá)載體pBV220，在大腸桿菌BL21中獲得了高效表達(dá)。但只有重組蛋白EAAg342能形成直徑10～20 mm的VLP顆粒。SDS-PAGE顯示該抗原能形成部

3、分二聚體結(jié)果，Western blot顯示該二聚體能與人抗HAV和HEV陽性血清反應(yīng)。 本研究評(píng)價(jià)了重組蛋白AEAg342和EAAg342誘導(dǎo)的特異體液免疫反應(yīng)。兩組昆明鼠，每組5只，分別注射一種重組抗原10μg+弗氏佐劑，3周后再注射一次，同時(shí)設(shè)一組空白對(duì)照組。于第一次免疫后2，4，6，8和10周采血測(cè)特異性抗HAV和HEV IGg滴度。結(jié)果顯示EAAg342誘導(dǎo)的抗體滴度在第8周達(dá)到了1:80 000，顯著高于AEAg342