新城疫病毒La Sota株的純化和免疫原性分析.pdf

1、新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒引起的一種禽類急性、高度接觸性傳染病，該病發(fā)病急、致死率高，自1926年首次暴發(fā)于印尼的爪哇和英國的新城以來，該病已經(jīng)傳播到世界許多國家和地區(qū)，一直是危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的主要禽病之一，被OIE列為A類疫病，我國農(nóng)業(yè)部將其列為一類疫病。NDV在分類地位上屬于副粘病毒科(Paramyxoviridae)、禽腮腺炎病毒屬(Rubulavirus)的成員之一，為單股不分節(jié)段的負(fù)鏈RNA

2、病毒。整個基因組長度約為15kb，包含6個功能基因：3’-NP-P-M-F-HN-L-5’，分別編碼6個主要蛋白質(zhì)(NP蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、HN蛋白和L蛋白)。目前國內(nèi)外仍無有效藥物和健全的方案來治療此類疾病，接種新城疫疫苗仍是我國各地以及國外預(yù)防該類傳染病暴發(fā)與流行的主要手段。 本試驗針對實驗室保存的新城疫La Sota病毒株作為疫苗用生產(chǎn)種毒的血凝效價、病毒含量以及穩(wěn)定性下降導(dǎo)致疫苗質(zhì)量下降的現(xiàn)象，通過蝕斑純化技術(shù)

3、，結(jié)合終點稀釋法對現(xiàn)有的疫苗用種毒進(jìn)行連續(xù)純化、篩選，選擇蝕斑大小主要在1.0～2.0mm左右，出斑整齊、性狀均一、產(chǎn)斑時間一致，均在接毒后60～72h產(chǎn)生大小均一的病毒蝕斑，連續(xù)蝕斑純化三代后，采用極限稀釋法，將稀釋度最大且血凝效價較高的尿囊液作為傳代接種物，繼續(xù)終點稀釋操作，連傳五代后。最終得到一株血凝效價高、病毒含量高且穩(wěn)定的疫苗用生產(chǎn)種毒，接種雞胚死亡時間較集中，主要在96～117h死亡。該純化株相對于原毒株，血凝價HA從9lo

4、g2提高到11log2，雞胚半數(shù)感染量(EIDso)從10-9.1/0.1mL提高到10-9.5/0.1 mL，且連續(xù)傳代均較穩(wěn)定。經(jīng)血清學(xué)鑒定、分子生物學(xué)鑒定結(jié)果顯示，該純化株融合蛋白F基因與血凝素和神經(jīng)氨酸酶的HN基因較原毒株同源性達(dá)到99.5％和98.6％，說明該純化株仍為La Sota病毒株，并未在篩選傳代的過程中發(fā)生變異。 經(jīng)免疫原性試驗、安全試驗和效力試驗，結(jié)果表明：該純化株安全性高、免疫原性好、效力強，對雛雞無不良