在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中鞘氨醇激酶1對(duì)烷化劑敏感性的研究.pdf

1、目的:
　　 應(yīng)用誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)從人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87中誘導(dǎo)培養(yǎng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞，分析其生物學(xué)活性。研究在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中鞘氨醇激酶與烷化劑敏感性關(guān)系。應(yīng)用鞘氨醇抑制劑誘導(dǎo)腫瘤干細(xì)胞分化增加烷化劑抗腫瘤效果，確定鞘氨醇激酶為膠質(zhì)瘤治療的有效靶點(diǎn)。
　　 方法:
　　 通過誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)從人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87當(dāng)中誘導(dǎo)培養(yǎng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞。利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞球CD133和巢蛋白(Nestin)。應(yīng)用MTT試驗(yàn)檢測(cè)膠質(zhì)

2、瘤干細(xì)胞和普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑藥物尼莫司丁(ACNU)的敏感性。應(yīng)用定量PCR技術(shù)比較膠質(zhì)瘤干細(xì)胞和普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞的鞘氨醇激酶1基因(SPHK1)表達(dá)差異。應(yīng)用MTT試驗(yàn)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞和普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞中應(yīng)用鞘氨醇激酶抑制劑(SKI)增加腫瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑藥物尼莫司丁(ACNU)敏感性。
　　 結(jié)果:
　　 試驗(yàn)表明應(yīng)用誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)可以培養(yǎng)出典型的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞球。通過MTT試驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)抗化療藥物的能力明顯高

3、于普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞。利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)到在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞出現(xiàn)CD133和Nestin熒光標(biāo)記。通過定量PCR膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中鞘氨醇激酶1(SPHK1)基因表達(dá)明顯高于普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞。通過MTT試驗(yàn)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)，鞘氨醇激酶抑制劑(SKI)能夠明顯增加腫瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑藥物(ACNU)敏感性。
　　 結(jié)論
　　 U87細(xì)胞中存在少量增殖、多向分化、抗烷化劑能力更強(qiáng)的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞。鞘氨醇激酶是一個(gè)治療腫瘤的有效靶點(diǎn)，通過應(yīng)用鞘氨