DCX和SPARC共表達對膠質瘤細胞生長、侵襲和放射敏感性的影響及其機制研究.pdf

1、目的：
　　構建DCX和SPARC雙基因共表達腺病毒載體（Ad-DCX-SPARC），研究其對膠質瘤細胞生長、侵襲和放射敏感性的影響及其機制研究。
　　方法：
　　1.PCR擴增獲得DCX和SPARC目的基因，構建針對 DCX和 SPARC的pAdTrack-CMV-DCX-polyA+promoter-SPARC雙基因共表達重組轉移質粒；
　　2.將構建正確的pAdTrack-CMV-DCX-polyA+pro

2、moter-SPARC重組轉移質粒經PmeI酶切后與pAdEasy-1腺病毒骨架質粒在BJ5183大腸桿菌中同源重組；
　　3.同源重組質粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-DCX-polyA+promoter-SPARC(簡稱為pAd-DCX-polyA+promoter-SPARC)經PacI酶切后再用脂質體轉染QBI-293A細胞，經多輪感染和擴增后獲得Ad-DCX-polyA+promoter-SPARC(簡稱

3、 Ad-DCX-SPARC)雙基因共表達重組腺病毒載體；
　　4.將Ad-DCX-SPARC重組腺病毒體外感染膠質瘤細胞U251和A172，篩選出Ad-DCX-SPARC的最佳感染劑量；
　　5.通過一系列檢測細胞增殖、侵襲和放射敏感性的實驗方法，研究增加DCX和SPARC雙基因共表達對膠質瘤細胞生長、侵襲和放射敏感性的影響，并分析其可能的作用機制。
　　結果：
　　1.成功構建了雙啟動子介導的DCX和SPARC

4、雙基因共表達腺病毒載體Ad-DCX-SPARC，其能高效感染膠質瘤細胞U251和A172，最佳感染劑量分別為20MOI和100MOI；
　　2.腺病毒介導的DCX和SPARC雙基因共表達能明顯抑制膠質瘤細胞的生長，削弱SPARC促膠質瘤侵襲的作用；
　　3.增加DCX-SPARC雙基因共表達能使U251和A172膠質瘤細胞照射后克隆形成能力明顯降低；
　　4.單純增加DCX和SPARC雙基因共表達對膠質瘤細胞凋亡無明顯

5、影響，但聯(lián)合輻照后能明顯促進膠質瘤細胞的凋亡；
　　5. DCX-SPARC雙基因共表達提高了照前G2期細胞的比例，聯(lián)合X射線照射后能減少照后G2期細胞的阻滯，從而減少了DNA損傷的修復，最終促進了膠質瘤細胞的死亡；
　　6.分子機制檢測結果表明Ad-DCX-SPARC聯(lián)合X射線照射能明顯上調U251和A172膠質瘤細胞bax，bad的表達和下調bcl-2的表達。
　　結論：
　　1.成功獲得了DCX和SPARC

6、雙基因共表達腺病毒載體Ad-DCX-SPARC，能明顯抑制膠質瘤細胞的生長，削弱SPARC促膠質瘤侵襲的作用；
　　2.DCX和SPARC雙基因共表達聯(lián)合X射線照射能通過抑制膠質瘤細胞的克隆形成、提高照射前G2期細胞阻滯、增加輻照引起的細胞凋亡、使細胞照后G2期的阻滯得到減弱從而減少照后DNA損傷的修復等機制提高腦膠質瘤細胞的放射敏感性；
　　3. Ad-DCX-SPARC聯(lián)合X射線照射可通過調節(jié)U251和A172細胞中ba