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1、目的:研究中藥知母提取物——知母皂甙B-Ⅱ?qū)^(guò)氧化氫誘導(dǎo)的RGC-5程序性壞死的作用,并初步探討其可能的機(jī)制。
方法:將培養(yǎng)的節(jié)細(xì)胞系RGC-5分為正常組(A組)、單純過(guò)氧化氫處理組(B組)、知母皂甙B-Ⅱ預(yù)處理C、D、E、F組。其中知母皂甙B-Ⅱ的濃度分別為1μmol/L(C組)、10μmol/L(D組)、100μmol/L(E組)、1000μmol/L(F組)。將A、B、C、D、E、F各組放37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育
2、24小時(shí)后,A、B組不作處理,C、D、E、F組分別加入相應(yīng)濃度的知母皂甙B-Ⅱ孵育24小時(shí)。在此基礎(chǔ)上,除A組外,每組均加入終濃度為300μmol/L H2O2孵育24小時(shí)。用倒置顯微鏡觀察各組處理后細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)AnnexinⅤ/PI雙染的程序性壞死的細(xì)胞,用MTT assay檢測(cè)RGC-5增殖活性,用微量丙二醇(MDA)試劑盒檢測(cè)RGC-5中MDA含量,用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量。<
3、br> 結(jié)果:300μmol/L H2O2孵育24小時(shí)后,MTT assay結(jié)果顯示細(xì)胞的抑制率達(dá)到60%,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)出大量AnnexinⅤ/PI雙染細(xì)胞,表明程序性壞死是H2O2誘導(dǎo)的RGC-5丟失的一種方式。預(yù)先用知母皂甙B-Ⅱ孵育24小時(shí)能顯著減少H2O2誘導(dǎo)的RGC-5的丟失,其保護(hù)作用在1μmol/L至100μmol/L濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。預(yù)先用100μmol/L知母皂甙B-Ⅱ孵育能顯著降低H2O2誘導(dǎo)的RGC-
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