陰道上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染抗菌肽LL-37和防御素5后對假絲酵母菌抑制作用的研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文陰道上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染抗菌肽LL37和防御素5后對假絲酵母菌抑制作用的研究姓名：王芳申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)；婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：尹利榮201205天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中聯(lián)合轉(zhuǎn)染細(xì)胞分泌LL37、HD5、IL8的水平均高于其它各亞組細(xì)胞，峰值分別為(10016081)ng／ml、(58q0’08)ng／ml和(10103159)pg／ml，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(尸005)，吸光度呈緩慢下降趨勢，其中聯(lián)合轉(zhuǎn)染細(xì)胞

2、6、12、24、48h的彳值分別為36100010、35900010、3560上l0010、35300010(尸005)；帶菌組中聯(lián)合轉(zhuǎn)染細(xì)胞么值6、12、24、48h分別為32100010、31500030、30990030、2970一1O040，明顯高于其他帶菌組細(xì)胞，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(尸O01)，且下降趨勢較其他帶菌組細(xì)胞緩慢。結(jié)論：(1)成功構(gòu)建了帶熒光蛋白的pcDNA3I()／LL一37EGFP和DcDNA3I()／HD5EG

3、FP的真核重組質(zhì)粒；(2)采用分步酶消化法K—SMF培養(yǎng)基進(jìn)行體外陰道上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)是較佳方法，原代人陰道上皮細(xì)胞活性、存活能力、單細(xì)胞分裂增生能力較強(qiáng)，免疫組化角蛋白染色陽性，細(xì)胞純度達(dá)到99％，苔盼藍(lán)拒染法證實細(xì)胞活力可達(dá)95％～99％。細(xì)胞傳代后仍在一定時間內(nèi)保持增殖能力，為陰道粘膜疾病的體外研究提供了實驗?zāi)Ｐ停?3)DcDNA3I()／LL37EGFP，pcDNA3I(／HD5EGFP真核重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染陰道上皮細(xì)胞后可在上皮細(xì)胞

4、中充分、高效的表達(dá)，表達(dá)的LL37及HD5蛋白具有活性，轉(zhuǎn)染真核重組質(zhì)粒后陰道上皮細(xì)胞LL37及HD5分泌量均明顯增加，假絲酵母菌生長密度及葡萄糖消耗量均減低直接增強(qiáng)了陰道上皮細(xì)胞抵抗假絲酵母菌的能力，且轉(zhuǎn)染兩種質(zhì)粒的陰道上皮細(xì)胞抑菌率最高，兩種質(zhì)粒的分泌有協(xié)調(diào)促進(jìn)作用。HD5及LL37可以刺激其下游炎癥趨化因子IL8的分泌，間接增強(qiáng)了陰道上皮細(xì)胞對假絲酵母茵的先天免疫能力。本研究為VVC的基因治療提供了可靠的實驗參考。關(guān)鍵詞：外陰陰道