siRNA下調(diào)NRP-1表達(dá)對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373MG細(xì)胞生長和MAPK信號通路的影響.pdf

1、siRNA下調(diào)NRP1表達(dá)對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373MG細(xì)胞生長和MAPK信號通路的影響TheinfluenceofsiRNAinterferingNRP1geneexpressiononU373MGhumangliomacellgrowthMAPKsignalingpathways碩士研究生：李祥云導(dǎo)師：黃延焱副教授導(dǎo)師小組成員：周厚廣副教授盧曉喆主治醫(yī)師復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院2012年4月老年科碩士學(xué)位論文中文摘要siRNA下調(diào)NRP

2、1表達(dá)對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373MG細(xì)胞生長和MAPK信號通路的影響中文摘要研究背景膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)腫瘤，其惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，術(shù)后易復(fù)發(fā)，是最棘手的難治性腫瘤之一。高度惡性的多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的1年和2年生存率分別為58%和31%。對膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制的研究和尋找新的治療紀(jì)點(diǎn)是膠質(zhì)瘤研究領(lǐng)域亟待解決的基本問題。神經(jīng)菌毛素l(Neuropilinl，NRPl)是細(xì)胞膜表面的一種單向跨膜糖蛋白，主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及神經(jīng)

3、細(xì)胞等，屬于非酪氨酸激酶輔助受體。在人類多種腫瘤組織中，NRP1均有過度表達(dá)的現(xiàn)象，對相關(guān)腫瘤的發(fā)生發(fā)展起著重要促進(jìn)作用。研究發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤患者的病理標(biāo)本中，NRP1亦呈現(xiàn)高表達(dá)，且與膠質(zhì)瘤的惡性程度及患者預(yù)后密切相關(guān)。目前NRP1在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作甩及其分子機(jī)制尚未完全明確阻礙了膠質(zhì)瘤的分子機(jī)制研究及以NRP1作為干預(yù)靶點(diǎn)探索膠質(zhì)瘤治療新方法的進(jìn)程。絲裂原活化蛋白激酶（MitogenactivatedproteinkinaseM

4、APK)通路是經(jīng)典的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、存活、轉(zhuǎn)化及凋亡等多重功能，與膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等相關(guān)密切。而NRP1對腦膠質(zhì)瘤的影響是否與MAPK信號通路有關(guān)，目前國內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。第一部分NRP1在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)及髙效NRP1siRNA序列的設(shè)計(jì)、合成和蹄選目的觀察NRP1蛋白在不同膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的表達(dá)情況，選取NRP1呈現(xiàn)較高表達(dá)的細(xì)胞系用于本實(shí)驗(yàn)，以及設(shè)計(jì)、合成和篩選高效NRP1s

5、iRNA序列。材料和方法1.運(yùn)用Westernblot(蛋白免疫印跡法）檢測惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系LN319、U373MG、U87MG、U118MG和U251MG中NRP1蛋白的表達(dá)情況。2.訂購Ambion公司化學(xué)合成的siRNA|C向NRP1基因的兩個(gè)目標(biāo)序列分別為：NRP1siRNAl5AAGCTCTGGGCATGGAATCAG3；NRP1siRNA25，AAAGCCCCGGGTACCTTACAT3，。將U373MG細(xì)胞（Western