人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞系中腦腫瘤干細(xì)胞的免疫磁珠分選與凋亡研究.pdf

1、目的：本課題首次采用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)和免疫磁珠分選(MACS)相結(jié)合的方法進(jìn)行人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞系中腦腫瘤干細(xì)胞(BTSC)的分離。然后進(jìn)行U251細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞的凋亡機(jī)制的探討，從而為腦膠質(zhì)瘤的防治及腫瘤疫苗的研制提供新的策略和分子靶標(biāo)。 方法：首先將U251細(xì)胞接種于含有生長(zhǎng)因子的無(wú)血清培基，通過(guò)無(wú)血清懸浮培養(yǎng)法得到含有大量BTSC的腦腫瘤干細(xì)胞球(BTS)，分離其中的BTSC，運(yùn)用免疫磁珠分選法對(duì)其進(jìn)行分選和純化，并

2、用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)，檢測(cè)分選后的CD133陽(yáng)性率。然后，對(duì)分選得到的BTSC進(jìn)行凋亡機(jī)制的探討，分別運(yùn)用流式細(xì)胞周期檢測(cè)、AO/EB雙染法和RT-PCR等方法，從不同層面闡明U251細(xì)胞系中BTSC的凋亡減少。 結(jié)果：利用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)和免疫磁珠分選(MACS)相結(jié)合的方法可以從U251細(xì)胞系中分離出陽(yáng)性率達(dá)到60％上的BTSC。通過(guò)流式細(xì)胞周期檢測(cè)及AO/EB雙染色和RT-PCR的方法，發(fā)現(xiàn)在人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞系中BTSC凋

3、亡減少，其中抑制凋亡的基因表達(dá)上調(diào)、促進(jìn)凋亡的基因表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論：1.U251細(xì)胞系中存在一定比例的腦腫瘤干細(xì)胞，利用含生長(zhǎng)因子的無(wú)血清培基懸浮培養(yǎng)技術(shù)，可以有效的分離培養(yǎng)BTS，將其與免疫磁珠分選法相結(jié)合可以分離得到陽(yáng)性率較高的BTSC，為BTSC的分離提供了新策略。2.U251細(xì)胞系中BTSC的凋亡減少，這可能是其無(wú)限生長(zhǎng)的重要分子機(jī)制之一。3.純化后的腦腫瘤干細(xì)胞為腦腫瘤的靶向基因治療及相關(guān)腫瘤疫苗的研制提供了重要的實(shí)驗(yàn)