人腦膠質(zhì)瘤干細胞初步研究.pdf

1、目的：從人腦膠質(zhì)瘤體外細胞系和膠質(zhì)瘤組織中分離鑒定腫瘤干細胞，為進一步研究其生物學特性奠基。 方法：1、將SHG44細胞系和SHG44-9細胞株，分別應用含血清培養(yǎng)基(DMEM+10％FCS)和無血清培養(yǎng)基(DMEM/F12，添加bFGF、LIF和EGF)培養(yǎng)。用CD133免疫磁珠分離干細胞、流式細胞儀檢測Hoechst33342和Nestin陽性細胞、免疫細胞化學染色檢測腫瘤干細胞及其分化細胞中的Nestin、NSE、GFA

2、P陽性細胞。2、采集8例人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標本，原代培養(yǎng)形成腫瘤球，經(jīng)免疫磁珠分離獲取CD133+細胞，用有限稀釋法在含細胞因子組合的無血清培養(yǎng)基中得到腫瘤細胞球后傳代。取第5代腫瘤干細胞，用含10％FBS培養(yǎng)液誘導分化。分化前后用Nestin、NSE、GFAP免疫細胞化學染色檢測腫瘤干細胞及其分化細胞的相應標志物。 結(jié)果：1、CD133磁珠分離得到的干細胞的比例：在血清組SHG44和SHG44-9分別為0.021％和0.035％

3、；無血清組分別為1.2％和2.3％。而Hoechst33342和CD133標記后流式細胞儀檢測干細胞比例：血清組中SHG44、SHG44-9分別為1.5％、0.37％；無血清組分別為16.4％和29.1％。并且這些細胞能夠增殖和分化成神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞。而Nestin標記后SHG44、SHG44-9中分別有51.05％、77.53％陽性細胞。2、在1例間變性室管膜瘤標本中克隆到了CD133+細胞，這些細胞在體外培養(yǎng)時能長期維持呈球形生長(