Livin特異性siRNA對人膽管癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中山大學(xué)博士后學(xué)位論文Livin特異性siRNA對人膽管癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究姓名：湯志華申請學(xué)位級別：博士后專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：陳積圣葉林20080101博士后出站報告Livin特異性siRNA對人月曼管癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究RNA，siRNA)后者再與體內(nèi)一些酶(包括內(nèi)切酶、外切酶、螺旋酶)結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RNAinducedsilencingcomplex，RISC)，RISC與目的基因按堿基配對

2、原則結(jié)合后對mRNA進(jìn)行降解。在哺乳動物細(xì)胞通過人為地引入合成的21“23bp雙鏈RNA就能起到siRNA作用，從而誘導(dǎo)內(nèi)源靶基因的mRNA降解，達(dá)到阻止基因表達(dá)的目的。因此應(yīng)用RNAi技術(shù)抑制某一異?；虮磉_(dá)將可能用于病毒、腫瘤等疾病的治療。本研究若能證實(shí)Livin基因在膽管癌的發(fā)生發(fā)展和判斷預(yù)后方面有重要的作用，我們將設(shè)計以Livin基因?yàn)榘袠?biāo)的siRNA，試探Livin—siRNA對人膽管癌細(xì)胞體外增殖及凋亡的影響，從而為膽管癌的

3、基因治療提供新的理論基礎(chǔ)。本研究的第一部分，利用RT—PCR、免疫組化法檢測了Livin在人膽管癌組織及膽管癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況，初步闡明Livin基因與膽管癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系；第二部分，利用化學(xué)合成的siRNA分子在體外抑制人膽管癌細(xì)胞系QBC939中Livin基因的表達(dá)，觀察Livin基因抑制后對人膽管癌細(xì)胞體外增殖、凋亡及侵襲性的影響，初步探討利用RNAi技術(shù)抑$1]Livin基因表達(dá)在膽管癌治療中的潛在意義。第一部分Livin

4、在人膽管癌組織及膽管癌細(xì)胞系中的表達(dá)和意義目的：探討Livin基因在人膽管癌組織及膽管癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況，初步分析Livin基因與膽管癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。方法：收集了45例人膽管癌組織及及20例非癌膽管組織標(biāo)本切片，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(SP法)檢鋇JJLivin蛋白分別在上述標(biāo)本中表達(dá)情況，分析Livin蛋白表達(dá)與膽管癌臨床病理特征的關(guān)系。同時采用RT—PCR法及SP法分別在mRNA和蛋白水平檢測了Livin在人膽管癌細(xì)胞系QBC