不同膽汁酸對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分、不同膽汁酸對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響 目的：探討結(jié)合膽汁酸包括甘氨膽酸（GCA），甘氨鵝脫氧膽酸（GCDCA）及甘氨脫氧膽酸（GDCA），游離膽汁酸包括膽酸（CA），鵝脫氧膽酸（CDCA）及脫氧膽酸（DCA）對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的改變。 方法：用MTT法檢測(cè)不同濃度的膽汁酸對(duì)膽管癌細(xì)胞活力的影響；在MTT實(shí)驗(yàn)中得出的膽汁酸有效濃度刺激膽管癌細(xì)胞，用相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，用流

2、式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各膽汁酸對(duì)膽管癌細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：結(jié)合膽汁酸在一定濃度范圍內(nèi)可以刺激細(xì)胞增殖，并具有時(shí)間和濃度依賴性（P<0.05），而游離膽汁酸在一定濃度范圍內(nèi)卻可以抑制細(xì)胞增殖，也具有時(shí)間和濃度依賴性（P<0.05）。GCA，GCDCA，GDCA，CA，CDCA，DCA的有效濃度分別為1200μmol/L、300μmol/L、200μmol/L、800μmol/L、100μmol/L、100μmol/L。相差顯微鏡顯示GC

3、A、GCDCA和GDCA作用組細(xì)胞形態(tài)無明顯變化，而CA、CDCA和DCA作用組細(xì)胞核固縮，細(xì)胞稀少，折光性減低。流式結(jié)果顯示GCA，GCDCA，GDCA組與對(duì)照組比較凋亡率無顯著差異，而CA，CDCA，DCA組與對(duì)照組比凋亡率有顯著差異（P<0.05）。 結(jié)論：結(jié)合膽汁酸可以刺激膽管癌細(xì)胞增殖，而游離膽汁酸可以促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡。結(jié)合膽汁酸濃度增加及游離膽汁酸濃度降低可能是膽汁淤積促進(jìn)膽管癌形成的原因。 第二部分、法尼酯

4、X受體在膽管癌中的表達(dá)特點(diǎn)及不同膽汁酸對(duì)其表達(dá)的影響 目的:探討法尼酯X受體（FXR）在人膽管癌組織中的表達(dá)以及不同膽汁酸對(duì)FXR表達(dá)的影響。 方法：用免疫組織化學(xué)Evision法檢測(cè)FXR在12例人膽管癌、5例癌旁陰性切緣及3例正常膽管組織的表達(dá)情況。分別用GCA、GCDCA、GDCA、CA、CDCA、DCA的有效濃度作用于膽管癌細(xì)胞，在12h，24h，48h，72h以RT-PCR檢測(cè)FXRmRNA水平變化。

5、結(jié)果：FXR在癌旁無瘤切緣和正常膽管組織中的表達(dá)顯著高于癌組織（P<0.01）,而在癌旁無瘤切緣與正常膽管組織中表達(dá)無顯著差異（P>0.05）。結(jié)合膽汁酸GCA、GCDCA及GDCA可抑制FXRmRNA的表達(dá)，而游離膽汁酸CA、CDCA及DCA可促進(jìn)FXRmRNA的表達(dá)。 結(jié)論：FXR可能是一個(gè)保護(hù)性受體，其表達(dá)下降可能是膽管癌形成的機(jī)制之一。膽汁酸可能通過改變FXR的表達(dá)影響膽管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。 第三部分、不同膽汁酸對(duì)膽

6、管癌白介素-6表達(dá)的影響 目的：探討結(jié)合膽汁酸及游離膽汁酸對(duì)膽管癌白介素-6（IL-6）表達(dá)的影響 方法：分別用GCA、GCDCA、GDCA、CA、CDCA、DCA的最佳濃度作用于膽管癌細(xì)胞，在24h，48h，72h以酶聯(lián)免疫法（Elisa）檢測(cè)膽管癌細(xì)胞IL-6表達(dá)的改變。 結(jié)果：結(jié)合膽汁酸GCA、GCDCA、GDCA促進(jìn)膽管癌細(xì)胞IL-6的表達(dá)，而游離膽汁酸CA、CDCA、DCA抑制膽管癌細(xì)胞IL-6的表達(dá)，