mTOR抑制劑AZD8055對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討mTOR抑制劑AZD8055對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其分子機(jī)制。
　　材料和方法: MTT法檢測(cè)不同濃度的AZD8055對(duì)HuCCT1膽管癌細(xì)胞體外增殖能力的影響;平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的AZD8055對(duì)HuCCT1細(xì)胞集落形成能力的影響;劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AZD8055對(duì)膽管癌細(xì)胞HuCCT1橫向遷移能力的影響;流式細(xì)胞儀檢測(cè)AZD8055對(duì)細(xì)胞凋亡的影響;蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AZD8055對(duì)膽管癌細(xì)胞自噬和凋亡

2、相關(guān)蛋白表達(dá)的影響及Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.MTT檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)25nM、50nM、100nM、200nM、400nM的AZD8055處理膽管癌細(xì)胞24h、48h、72h后，與對(duì)照組相比其增殖率明顯降低，呈劑量依賴性(P＜0.05);2.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，25nM、50nM和100nM作用于HuCCT1細(xì)胞14天后，均顯著抑制細(xì)胞集落形成能力(P＜0.05);3.細(xì)胞劃

3、痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示:經(jīng)100nM和200nM濃度的AZD08055處理細(xì)胞后，與對(duì)照組相比膽管癌細(xì)胞遷移距離明顯縮短(P＜0.05);4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示:50nM、100nM、200nM濃度AZD8055處理膽管癌細(xì)胞48h后，與對(duì)照組相比，其誘導(dǎo)凋亡效果不明顯;5.蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，Cleaved caspase3和促凋亡蛋白Bax下調(diào)，抗凋亡蛋白Bcl-2上調(diào)，且呈濃度依賴性(P＜0.05);與對(duì)照組相比，

4、經(jīng)100nM、200nM、400nM濃度AZD8055處理膽管癌細(xì)胞24h后，自噬相關(guān)標(biāo)記物Beclin1蛋白的表達(dá)增高，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例也增高(P＜0.05);與對(duì)照組相比，Akt、S6、4EBP1的磷酸化蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論:1.AZD8055可抑制膽管癌細(xì)胞增殖能力，其機(jī)制與誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和下調(diào)Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān);2.AZD8055可抑制膽管癌細(xì)胞的橫向遷移能力，其機(jī)制與下調(diào)Akt/