野生型XPD轉(zhuǎn)染對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響.pdf

1、目的:應(yīng)用野生型XPD基因轉(zhuǎn)染人膽管癌細(xì)胞QBC939,探討野生型XPD基因?qū)θ四懝馨┘?xì)胞的生物學(xué)影響。
　　 方法:用堿裂解法提取重組質(zhì)粒pEGFP-N2一XPD和空載質(zhì)粒pEGFP-N2,所提取質(zhì)粒以KPNⅠ、BGⅠⅡ和SPHⅠ酶切鑒定。實(shí)驗(yàn)分四組,重組質(zhì)粒pEGFP-N2-XPD組、空載質(zhì)粒pEGFP-N2組、脂質(zhì)體組,并用具有相同遺傳背景和代數(shù)的QBC939細(xì)胞作為空白對(duì)照組。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染四組細(xì)胞。熒光顯微鏡下

2、觀察轉(zhuǎn)染后綠色熒光蛋白報(bào)告基因表達(dá)情況。提取各組細(xì)胞總RNA,合成cDNA,用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)四組細(xì)胞中XPD、p53、cyclinD1、c-myc表達(dá)情況,并用四甲基偶氮唑鹽(MTT)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖及其細(xì)胞周期的變化。
　　 結(jié)果:1.RT-PCR檢測(cè)pEGFP-N2-XPD、pEGFP-N2、脂質(zhì)體組和空白對(duì)照組細(xì)胞中XPD mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為:0.778±0.018、0.561±0.039、0.5

3、44±0.035、0.542±0.034;pEGFP-N2-XPD細(xì)胞與pEGFP-N2、脂質(zhì)體組和空白對(duì)照組相比,XPD mRNA表達(dá)量明顯增加(P<0.01)。四組細(xì)胞中p53 mRNA相對(duì)表達(dá)量為:0.421±0.019、0.256±0.014、0.267±0.015、0.274±0.018,pEGFP-N2-XPD細(xì)胞中p53 mRNA相對(duì)表達(dá)量與三對(duì)照組比較明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。四組細(xì)胞中cyclinD

4、1 mRNA相對(duì)表達(dá)量為:0.339±0.041、0.560±0.039、0.558±0.050、0.560±0.041,pEGFP-N2-XPD細(xì)胞與三對(duì)照組相比,cyclinD1 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯降低(P<0.01)。四組細(xì)胞中c-mycmRNA相對(duì)表達(dá)量為:0.355±0.045、0.570±0.075、0.560±0.041、0.537±0.050,pEGFP-N2-xPD細(xì)胞與三對(duì)照組相比,c-myc mRNA相對(duì)表達(dá)量

5、明顯降低(P<0.01)。2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)pEGFP-N2-XPD組細(xì)胞周期G1期為81.65％,S期為11.83％,三對(duì)照組G1期分別為65.54％、56.61％、63.26％；S期分別為24.10％、29.52％、27.28％,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.MTT檢測(cè)示pEGFP-N2-XPD細(xì)胞生長(zhǎng)率為0.249±0.02與三對(duì)照組相比,細(xì)胞增殖力明顯減弱(P<0.01)。
　　 結(jié)論:野生型XPD基因可以抑制