香菇纖維素酶基因exg1的克隆及其表達(dá).pdf

1、我國是一個(gè)飼料資源十分緊張的國家，土地少、人口多，人畜爭(zhēng)糧的矛盾十分突出。要保持我國飼料工業(yè)和畜牧業(yè)的持續(xù)發(fā)展，必須解決好飼料問題，否則將嚴(yán)重制約其發(fā)展。纖維素是植物光合作用的主要多糖類產(chǎn)物，由800-1200個(gè)葡萄糖分子聚合而成，是地球上最廉價(jià)、最豐富的可再生資源。全世界每年的植物體生成高達(dá)1500億噸干物質(zhì)，其中纖維素及半纖維素的總量為850億噸，但都被很少利用。因此，成功開發(fā)這一潛在飼料資源顯得尤為迫切和重要。纖維素酶是一類能夠降

2、解纖維素生成葡萄糖的酶的總稱，它是一類復(fù)雜的復(fù)合物，稱之為纖維素酶系，通常分為內(nèi)切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。近年來，隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，通過基因工程途徑，構(gòu)建生產(chǎn)纖維素酶的高效基因工程菌已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)。
　　本研究通過RT-PCR技術(shù)，從亞洲香菇中克隆出香菇纖維素酶基因exg1，并分析了該基因的序列，構(gòu)建了原核表達(dá)載體，通過SDS-PAGE對(duì)該基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物進(jìn)行了分析，用CMC-Na法定性檢測(cè)了重組菌產(chǎn)

3、生的纖維素酶的活力。本研究主要取得了以下結(jié)果:
　　1.采用RT-PCR技術(shù)，從香菇的cDNA中分離出大小約1537bPexg1的片段。
　　2.利用載體pET-28a，構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-28a-exg1。驗(yàn)證分析表明，所克隆的exg1基因已置于表達(dá)載體的正確閱讀密碼框下。
　　3.包含pET-28a-exg1重組菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE分析，蛋白的分子量大約為57kDa，通過與葡聚糖水解酶家族5