胚胎附植相關因子在母豬妊娠早期的表達及其對產(chǎn)仔數(shù)的影響.pdf

1、本論文根據(jù)已知的人和小鼠Integrin αVβ3基因cDNA序列的保守區(qū)域設計了四對引物，擴增得到了Intern αV亞基的部分外顯子5、外顯子6～29和部分外顯子30，長度為2508 bp，編碼835個氨基酸；Integrin β3亞基的外顯子3、外顯子4～8和大部分外顯子9，以及外顯子15的中間部分，長度分別為1035 bp和1059 bp，編碼344個氨基酸。序列比對發(fā)現(xiàn)，兩個亞基的cDNA和氨基酸序列都與人和小鼠對應序列有較高

2、的同源性。 通過RT-PCR和免疫組化方法對母豬妊娠第12、18和25天Integrin αV和β3亞基在子宮內(nèi)膜中的mRNA和蛋白表達研究發(fā)現(xiàn)，胚胎附植的不同階段Intern αV和β3亞基在子宮內(nèi)膜中的表達都存在明顯差異，mRNA與蛋白表達的趨勢一致，都是在胚胎附植中期(妊娠第18天)的表達量最高。說明其在母豬妊娠早期，即胚胎的黏附和附植過程中有重要作用。免疫組化結果顯示：Integrin αV在子宮內(nèi)膜腺體上皮、腔上皮、間

3、質(zhì)細胞、基質(zhì)細胞和血管內(nèi)皮細胞等細胞上都有免疫陽性反應，在胚胎著床的不同時期具有明顯變化，妊娠第18天表達較強。Integrin β3的免疫陽性反應與IntegrinαV基本一致，但是，不如Integrin αV的表達變化明顯。實驗還發(fā)現(xiàn)Integrin αV和β3在位于子宮內(nèi)膜腔上皮下面的基質(zhì)中有較強的表達，同樣在妊娠第18天表達最強。說明豬的子宮內(nèi)膜基質(zhì)具有類蛻膜化的反應，只是與人和其他哺乳動物相比，其蛻膜化的程度相對較弱而已。

4、 對受精配種后母豬血液FSH、LH、E<,2>和P<,4>水平檢測發(fā)現(xiàn)，相對于未妊娠時期，在妊娠前25天內(nèi)FSH和LH的水平都有所下降，但妊娠第12～25天內(nèi)變化不顯著(p>0.05)。在妊娠第12～25天期間P<,4>的水平變化也不是很大，然而，E<,2>的水平以及E2:P4的比值卻明顯增加。子宮內(nèi)膜中Integrin αV和β3 mRNA的表達與血液中LH、FSH、E<,2>和P<,4>的水平都呈現(xiàn)負相關，但相關性都不顯著性(p

5、>0.05)。表明，Intern αV和β3的表達不受生殖激素影響，或影響很小。 利用PCR-SSCP方法對Integrin β3、LIF和IL-1β基因多態(tài)性與大白豬產(chǎn)仔數(shù)之間的關系進行了研究，結果發(fā)現(xiàn)Integrin β3對產(chǎn)仔數(shù)影響不顯著(p>0.05)。對LIF基因研究表明，三胎以上LJF1位點優(yōu)勢等位基因?qū)NB和NBA的加性效應分別為0.28和0.32；而LIF2位點優(yōu)勢基因的加性效應分別為0.29和0.11。兩個位

6、點合并分析結果表明，在三胎以上或所有胎次，合并基因型AAAA、ABBB 和BBBB 的TNB 和NBA 都顯著高于 AAAB、AABB 和 ABAB 基因型。其中，AAAA基因型母豬的所有胎次的TNB和NBA都要比AAAB型母豬分別高1.76(p<0.001)和1.44頭(p<0.01)。總之，LIF基因?qū)δ肛i的產(chǎn)仔數(shù)有顯著影響。對IL-1β基因研究發(fā)現(xiàn)，分別在310 bp和347 bp處各發(fā)現(xiàn)一個突變位點，其中310 bp處的突變對產(chǎn)