Ghrelin對豬附植前胚胎的影響及GHSR在豬、鼠附植前胚胎的表達.pdf

1、已有的研究表明Ghrelin與動物的生殖與發(fā)育密切相關(guān),但目前關(guān)于Ghrelin對哺乳動物附植前胚胎發(fā)育的調(diào)節(jié)研究較少,且不同研究小組的結(jié)果也不相一致。本論文以豬孤雌胚為試驗材料,研究不同濃度Ghrelin添加劑對豬孤雌胚胎早期發(fā)育的影響,并通過免疫熒光染色法與半定量PCR技術(shù)研究Ghrelin受體ghsr在豬孤雌激活(partheno-activated,PA)胚、昆明小鼠體內(nèi)受精胚胎、體外受精(In vitro fertilized

2、,IVF)胚和PA胚不同發(fā)育階段的表達水平,總結(jié)其在早期胚胎發(fā)育中的表達規(guī)律,為闡明Ghrenlin對哺乳動物早期胚胎發(fā)育的作用機制奠定一定基礎(chǔ)。研究分為以下兩部分:
　　1.Ghrelin對豬孤雌胚早期發(fā)育的影響:
　　將豬PA胚培養(yǎng)于添加不同濃度(0ng/ml(對照),0.1ng/ml,1ng/ml,10ng/ml與100ng/ml)Ghrelin的PZM3培養(yǎng)液中,觀察不同濃度Ghrelin對豬PA胚胎卵裂率、囊胚發(fā)育

3、率及胚胎發(fā)育速度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):添加10ng/mlGhrelin組的4-Cell發(fā)育率、8-Cell發(fā)育率、桑椹胚率及囊胚率均顯著高于對照組和添加0.1ng/ml組(P<0.05);添加100ng/ml組的4-Cell發(fā)育率、8-Cell發(fā)育率均顯著高于添加0.1ng/ml組(P<0.05);各組間(包括試驗組與對照組)在卵裂率上無顯著差異(P>0.05);
　　2.GHSR在附植前不同發(fā)育階段胚胎中的表達
　　以半定量P

4、CR方法和間接免疫熒光法檢測豬孤雌胚及昆明小白鼠自然受精胚、體外受精胚及孤雌發(fā)育胚附植前不同發(fā)育時期ghsrmRNA轉(zhuǎn)錄和ghsr蛋白表達,結(jié)果發(fā)現(xiàn):
　　(1)在豬PA胚早期的各個發(fā)育時期(2-Cell、4-Cell、8-Cell、致密桑椹胚及囊胚期)均有g(shù)hsrmRNA轉(zhuǎn)錄,在4-Cell期稍有降低,8-Cell最高,以后持續(xù)降低,到囊胚期顯著下降;免疫熒光染色顯示在豬PA胚早期的各個時期蛋白均有表達,但各發(fā)育階段表達量未見明

5、顯差異。
　　(2)在小鼠PA胚附植前各發(fā)育階段均可檢測到ghsrmRNA,其表達水平明顯高于相同發(fā)育階段的自然受精胚及IVF胚,自2-Cell期到8-Cell期其轉(zhuǎn)錄水平持續(xù)下降,之后直到囊胚期則持續(xù)回升;免疫熒光染色結(jié)果顯示,在小鼠孤雌發(fā)育胚早期的各個時期GHSR蛋白均有表達。
　　(3)在小鼠體外受精胚早期發(fā)育的各個時期ghsrmRNA及蛋白均有不同程度的表達,在致密化階段表達量最高,在小鼠體外受精胚早期發(fā)育的各個時期