胰腺纖維化進(jìn)程中胰腺GnRH、GnRHR、Bcl2、Bax和胰島β細(xì)胞功能的變化.pdf

1、胰源性糖尿病是指由于胰腺外分泌疾病引起內(nèi)分泌功能不足的一種特殊類型的糖尿病，屬于繼發(fā)性糖尿病。慢性胰腺炎是胰源性糖尿病的主要病因，而胰腺纖維化是慢性胰腺炎的重要病理特征。研究證明，慢性胰腺炎中胰腺組織中Bcl2（B cell lymphoma 2）及Bax（Bcl-2-associated protein）參與細(xì)胞凋亡過(guò)程，Bax:Bcl2增加提示細(xì)胞凋亡增加。促性腺激素釋放激素（gonadotropin-releasing hormo

2、ne，GnRH）及促性腺激素釋放激素受體（gonadotropin-releasinghormone receptor，GnRHR）的研究發(fā)現(xiàn)二者在腫瘤組織中也有直接參與細(xì)胞分化增殖的作用。目前認(rèn)為胰腺GnRH及GnRHR可能通過(guò)旁分泌和/或自分泌途徑影響胰島β細(xì)胞功能，但二者的具體作用通路尚不清楚。
　　目的:
　　觀察胰腺纖維化進(jìn)程中GnRH及GnRHR、Bcl2及BaxmRNA水平表達(dá)有無(wú)變化，以及胰島β細(xì)胞功能的變化

3、，探討GnRH、GnRHR與胰島β細(xì)胞功能和Bcl2及Bax變化之間的關(guān)系。
　　方法:
　　成年雄性SD（Sprague Dawley）大鼠共25只，體重為250-300g，隨機(jī)分為對(duì)照組（A組）、注藥1、2、3、6周組（分別記為B、C、D、E組），每組5只。反復(fù)腹腔內(nèi)注射二乙基二硫代氨基甲酸鹽（diethyldithiocarbamate,DDC）法制作SD大鼠胰腺纖維化動(dòng)物模型，注藥各組大鼠每周腹腔內(nèi)注射兩次DDC，D

4、DC用生理鹽水稀釋，用量為500mg/kg大鼠體重，依分組決定注射周數(shù)。對(duì)照組大鼠腹腔內(nèi)注射相同劑量生理鹽水。每組大鼠在注藥結(jié)束后灌胃法行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（oral glucose tolerance test，OGTT），尾靜脈取血，同批次測(cè)定血糖、血清胰島素。禁食12小時(shí)后，戊巴比妥鈉腹腔麻醉處死大鼠，迅速取出胰腺組織，分為兩部分待用。一部分用4％福爾馬林固定，石蠟包埋，石蠟切片HE染色；部分用于提取組織總RNA，Bio-Rad

5、IQ5 System進(jìn)行Real Time-PCR（RT-PCR）。PCR產(chǎn)物通過(guò)2％瓊脂糖凝膠電泳鑒定。
　　結(jié)果:
　　1．病理改變胰腺組織切片在光鏡檢查，可見(jiàn)A組胰腺腺泡及胰島β細(xì)胞形態(tài)完整，B、C、D組分別可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、腺泡細(xì)胞萎縮、空泡變化、小葉間隙增寬，E組可見(jiàn)腺泡細(xì)胞呈纖維素樣排列。
　　2．胰島β細(xì)胞功能變化各組間OGTT試驗(yàn)的血糖無(wú)差異（P>0.05），注藥各組間OGTT試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血清胰島素比較

6、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與A組比較，D組空腹血清胰島素/空腹血糖比值（FINS/FBG）和HOMA-胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）升高；C組FINS/FBG下降；C組和E組灌糖30分鐘時(shí)血清胰島素/血糖比值（INS/PG(30min)）、胰島素初期反應(yīng)指數(shù)（△△IRI/BS(30min)）和血清胰島素曲線下面積（INS-AUC）明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；D組HOMA-胰島素敏感性指數(shù)（HOMA-S％）下降，

7、P=0.05。
　　3．胰腺GnRH、GnRHR、Bcl2、BaxmRNA水平表達(dá)變化各組間胰腺GnRH比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B組、D組分別E組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，E組表達(dá)最高（P<0.05）；與A組比較，B組和D組胰腺GnRHR表達(dá)降低，D組和E組胰腺Bcl2表達(dá)增加，B組和E組胰腺Bax表達(dá)增加，注藥各組Bcl2:Bax比值升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.相關(guān)性分析胰腺GnRH與空腹血糖呈負(fù)相關(guān)（

8、r=-0.443）；胰腺GnRHR與糖負(fù)荷15min血清胰島素呈正相關(guān)（r=0.435），與Bcl2：Bax呈負(fù)相關(guān)（r=-0.813），15min血清胰島素與Bcl2：Bax呈正相關(guān)（r=0.431）。P值均小于0.05。
　　結(jié)論:
　　1．胰腺纖維化早期胰島β細(xì)胞功能下降；
　　2．胰腺纖維化進(jìn)程中，Bcl2:Bax比值上升，提示此時(shí)以細(xì)胞增殖為主；
　　3．GnRHR與Bcl2:Bax上升呈負(fù)相關(guān)，提示G