DDFA對重癥胰腺炎大鼠心臟細(xì)胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表達(dá)的影響.pdf

1、背景 重癥急性胰腺炎(SAP)常并發(fā)多器官功能障礙(MODS)，其胰外器官損傷中，心功能障礙(胰心綜合征)較為常見，急性胰腺炎之心臟血管反應(yīng)與損害包括心功能改變、心律失常、休克、中毒性心肌炎、心包炎、心肌梗死。重型或出血壞死型胰腺炎出現(xiàn)休克高達(dá)22％，3.8％死于心功能不全，SAP時(shí)的心血管失代償是導(dǎo)致病死率最高的并發(fā)癥。細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因是目前生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，在外科多種疾病的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸中已受到越來越多的關(guān)注。過去認(rèn)

2、為在終末分化的成人細(xì)胞中如心肌細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞并不發(fā)生細(xì)胞凋亡，但是最近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，心肌細(xì)胞在缺氧條件下培養(yǎng)以及體外缺血再灌注后的心肌都出現(xiàn)了細(xì)胞凋亡；在心肌梗死、快速心室起搏導(dǎo)致的心力衰竭、冠狀動脈栓塞、壓力超載性肥大等動物模型中也出現(xiàn)了病理性細(xì)胞凋亡；在末期擴(kuò)張性心肌病患者的心肌中以及死于心肌梗死患者的心肌梗死區(qū)和梗死邊緣區(qū)都出現(xiàn)了細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡是造成心肌細(xì)胞死亡的主要原因；此外在終末期分化的細(xì)胞中應(yīng)用一些試劑誘導(dǎo)時(shí)也可以出

3、現(xiàn)細(xì)胞凋亡，它包括在傳統(tǒng)上被認(rèn)為是缺血缺氧造成的細(xì)胞壞死。目前關(guān)于SAP時(shí)心肌細(xì)胞凋亡的研究不多，進(jìn)一步深入研究顯得十分必要。 DDFA已經(jīng)臨床證實(shí)對SAP有明顯的治療效果，但其治療SAP的機(jī)理如何，是否通過調(diào)控細(xì)胞凋亡對SAP起治療作用，對機(jī)體各重要臟器細(xì)胞凋亡是否有影響，在什么時(shí)間、用什么方式、什么劑量應(yīng)用影響最大、效果最好，DDFA各藥物間在影響細(xì)胞凋亡方面是否有協(xié)同或拮抗作用，進(jìn)一步調(diào)整該方案、調(diào)整藥物間的劑量組合是否有

4、更好的效果，等等，這些問題都需要進(jìn)行驗(yàn)證和探索。本課題擬通過動物實(shí)驗(yàn)解決這些問題中的一部分，以利于臨床DDFA方案的進(jìn)一步完善，并為此方案臨床推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。 目的 1、研究正常大鼠心肌細(xì)胞凋亡及Bax、Bcl-2基因的表達(dá)情況。 2、研究大鼠發(fā)生重癥胰腺炎(SAP)后心肌細(xì)胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表達(dá)的變化，探討細(xì)胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表達(dá)在SAP大鼠心臟損傷中的作用，從而明確SAP心臟損傷

5、的部分機(jī)制。 3、研究SAP大鼠應(yīng)用DDFA治療后心肌細(xì)胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表達(dá)的變化情況，明確DDFA對SAP大鼠心臟損傷的治療作用，探討DDFA對SAP心臟損傷的治療機(jī)制，為DDFA方案的臨床應(yīng)用及推廣提供理論基礎(chǔ)。 材料和方法 1、45只大鼠隨機(jī)分成三組：SO組(假手術(shù)組)15只；SAP組15只；DDFA治療組15只。每組再分為6h、12h、18h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分配5只大鼠。 2、

6、大鼠SAP模型采用5％?；悄懰徕c逆行膽胰管注射法建立；SO組僅行胰膽管穿刺操作，不注射藥物；DDFA組在SAP模型誘發(fā)后，經(jīng)頸靜脈注射DDFA。3、建模后12h時(shí)分別處死各組大鼠，肉眼觀察腹腔臟器改變情況，HE染色觀察心肌組織病理變化，全自動生化分析儀測定血cTnI、CK-MB，硫代巴比妥酸反應(yīng)法測定心肌MDA含量，羥胺法測定心肌SOD含量，TUNEL法測定心肌細(xì)胞凋亡，SABC免疫組化染色法測定心肌Bax、Bcl-2基因表達(dá)。

7、 結(jié)果 1、SO組心肌未見病理損害，血cTnI、CK-MB正常，心肌MDA和SOD正常，偶見心肌細(xì)胞凋亡，Bax和Bcl-2均僅有較弱表達(dá)。 2、SAP組心肌組織病理損害較明顯，血cTnI、CK-MB較SO組明顯升高，心肌MDA也明顯升高，而SOD則明顯降低。心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著高于SO組(P＜0.01)，心肌Bax蛋白表達(dá)水平也顯著高于SO組(P＜0.01)，Bcl-2蛋白的表達(dá)水平也高于SO組(P＜0.01)，Bcl

8、-2/Bax比值則低于SO組。 3、DDFA組心肌組織病理損害較SAP組減輕，血cTnI、CK-MB下降，心肌MDA亦明顯降低，而SOD則上升。心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)低于SAP組(P＜0.01)，Bax蛋白表達(dá)水平也低于SAP組(P＜0.01)，Bcl-2蛋白的表達(dá)水平則高于SAP組(P＜0.05)。Bcl-2/Bax比值也高于SO組。 結(jié)論 1、SAP發(fā)生后，心肌病理形態(tài)受到明顯損害，凋亡細(xì)胞明顯增多，AI升高，并隨

9、著時(shí)間延長而逐漸增高，AI的變化與cTnI、CK-MB及心肌MDA呈明顯的正相關(guān)，而與心肌SOD呈明顯的負(fù)相關(guān)。說明SAP心臟損傷至少部分是通過細(xì)胞凋亡機(jī)制引起的，而且細(xì)胞凋亡是造成心功能進(jìn)一步惡化的重要因素之一。 2、應(yīng)用DDFA治療后，心肌病理形態(tài)改善，MDA下降，而SOD上升，凋亡細(xì)胞減少，AI明顯下降。說明DDFA對SAP心臟損傷有明顯的治療作用，在SAP早期給予DDFA治療對減輕心臟損害程度、改善預(yù)后是有益的。

10、 3、正常心肌Bax和Bcl-2均有較弱表達(dá)，總體上兩類基因處于相對平衡狀態(tài)；SAP時(shí)Bax和Bcl-2的表達(dá)均增強(qiáng)，Bax增強(qiáng)較明顯，Bcl-2增幅相對較小，因此Bcl-2/Bax比值下降，凋亡促進(jìn)基因與凋亡抑制基因的平衡狀態(tài)受到破壞；應(yīng)用DDFA治療后，Bax基因表達(dá)顯著下調(diào)，而Bcl-2基因表達(dá)顯著上調(diào)，Bcl-2/Bax比值上升。說明SAP時(shí)心臟細(xì)胞凋亡與凋亡相關(guān)基因失衡有關(guān)，DDFA對SAP心肌的保護(hù)作用可能部分是通過調(diào)節(jié)凋亡