雌激素對(duì)EAE大鼠細(xì)胞凋亡及調(diào)控基因Bcl-2、Bax的影響.pdf

1、目的：建立Wistar大鼠去卵巢后實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)動(dòng)物模型，觀察雌二醇(estradiol，E2)對(duì)EAE的治療效果，及其對(duì)EAE中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的影響，為臨床應(yīng)用E2治療多發(fā)性硬化(mltiplesclerosis，MS)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1.四肢足掌皮內(nèi)注射完全福氏佐劑-豚鼠全脊髓

2、勻漿(CFA-GPSCH)，并輔以注射百日咳疫苗，誘導(dǎo)去卵巢Wistar大鼠建立EAE模型。將去卵巢雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、EAE組和E2治療組，免疫后第0天E2治療組肌肉注射E2500μg/kg·d，對(duì)照組及EAE組給予等體積的花生油注射，免疫后第20天停止注射。觀察各組的發(fā)病情況至30天。放射免疫法測(cè)血清E2濃度。2.發(fā)病后三天處死動(dòng)物，用HE染色觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度，用3'末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)

3、介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)其細(xì)胞凋亡情況。免疫組化檢測(cè)浸潤(rùn)細(xì)胞Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。放射免疫法測(cè)血清E2濃度。 結(jié)果：1.對(duì)照組未見(jiàn)發(fā)病，體重增高最高值10.12±1.28。EAE組發(fā)病率為83.3％，潛伏期12.10±0.99天，癥狀持續(xù)時(shí)間14.00±1.15，臨床評(píng)分最高值3.10±0.99，體重降低最高值28.50±1.85：E2治療組發(fā)病率為33.3％，潛伏期為15.50±1.29，癥狀持續(xù)

4、時(shí)間12.00±0.82，臨床評(píng)分最高1.50±0.58，體重降低最高值22.68±1.53。與EAE組相比，E2治療組發(fā)病率、潛伏期、癥狀持續(xù)時(shí)間、臨床評(píng)分最高值、體重降低最高值差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。對(duì)照組血清E2濃度為11.53±2.87pmol/l，EAE組血清E2濃度為10.62±1.35pmol/l，E2治療組血清E2濃度為78.25±0.46pmol/l，對(duì)照組和EAE組血清E2濃度差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.0

5、5)，E2治療組與對(duì)照組、EAE組血清E2濃度比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。2.對(duì)照組大鼠未見(jiàn)明顯異常病理改變。EAE組血管周?chē)装Y浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù)為70.19±20.79，凋亡細(xì)胞數(shù)為5.26±4.43，凋亡率6.97％；E2治療組血管周?chē)装Y浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù)為42.35±24.38，凋亡細(xì)胞數(shù)為6.08±3.50，凋亡率13.34％，兩組相比差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。EAE組每個(gè)浸潤(rùn)細(xì)胞Bcl-2的積分光密度為49.29±1

6、8.23，Bax的積分光密度為25.38±17.85，Bcl-2/Bax為2.28±0.65；E2治療組每個(gè)浸潤(rùn)細(xì)胞Bcl-2的積分光密度為30.33±16.75，Bax的積分光密度為26.75±14.41，Bcl-2/Bax為1.24±0.13，兩組相比，每個(gè)浸潤(rùn)細(xì)胞Bcl-2的積分光密度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，Bax的積分光密度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，Bcl-2/Bax差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。EAE組血