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文檔簡介
1、 本課題選擇在血小板無力癥患者中新發(fā)現(xiàn)的αⅡb1292~1307del、αⅡbA446P及αⅡbG747P這3種突變進行體外表達,并用EGFP標(biāo)記突變αⅡb后進行細(xì)胞內(nèi)定位研究,旨在明確這些突變對αⅡbβ3的合成、轉(zhuǎn)運和表達的影響;探討其引起血小板無力癥的分子發(fā)病機制并初步分析相應(yīng)突變對αⅡbβ3的結(jié)構(gòu)與功能的影響。 為了進行體外轉(zhuǎn)染和表達實驗,本研究采用overlap法在野生型的αⅡb表達質(zhì)?;A(chǔ)上構(gòu)建了pcDNA3.1-α
2、Ⅱb1292~1307del、pcDNA3.1-αⅡbA446P及pcDNA3.1-αⅡbG747P表達質(zhì)粒。測序結(jié)果表明這3種突變αⅡb表達質(zhì)粒除了目標(biāo)突變外無其它DNA序列錯誤。αⅡb亞基突變的研究需要與GPⅢa亞基共表達,本研究建立了可以穩(wěn)定表達GPⅢa亞基的CHO細(xì)胞株。 本研究表明αⅡb1292~1307del、αⅡbA446P及αⅡbG747P這3種突變均不同程度地影響了αⅡbβ3復(fù)合物的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運,是血小板無力癥的分子發(fā)
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