維生素B6對血小板保存期間形態(tài)和功能的影響研究.pdf

1、維生素B6或vitamin B6(pyridoxine,VitB6),是蛋白質(zhì)代謝中氨基酸脫羧酶及轉(zhuǎn)氨酶的輔助成分,也是目前應(yīng)用比較廣泛的維生素B類藥物。臨床上主要用于維生素B6缺乏癥、人類鐵粒幼細胞性貧血、鐮狀細胞性貧血、精神分裂癥、吡哆醇反應(yīng)性癲癇、哮喘等疾病的治療。近年來,隨著人們對VitB6作用機制研究的深入,以及藥理學的研究進展,特別是在輸血醫(yī)學領(lǐng)域,最新的研究發(fā)現(xiàn)VitB6可以促進內(nèi)源性一氧化氮和血小板源性一氧化氮的生物合成

2、。這種生化反應(yīng)對血小板體外保存具有保護作用,因為血小板在體外保存過程中,隨著保存時間的延長其血小板形態(tài)發(fā)生改變,血小板被活化,使其功能發(fā)生改變,影響臨床輸注效果,甚至導致血小板輸注無效(PTR)。因此在血小板保存期間,如何有效地保護血小板的功能和形態(tài),進而提高血小板臨床輸血效果是當前輸血領(lǐng)域的研究熱點。研究發(fā)現(xiàn)VitB6和血小板表面蛋白會發(fā)生特殊結(jié)合,從而防止血小板凝聚活化,起到了保護血小板功能形態(tài)的作用。本研究擬通過補充VitB6改善

3、保存期間血小板的形態(tài)和功能,探討VitB6保護血小板形態(tài)和功能的可能機理,為血小板有效保存,防止活化提供可參考的客觀依據(jù)。
　　 目的:向保存期間的血小板(stored platelet)保存袋內(nèi)加入不同濃度的VitB6,觀察其在有效保存期內(nèi)血小板形態(tài)和功能的變化,探討VitB6在血小板儲存中的最佳保存濃度和可能作用機制。
　　 方法:1.分別采集6位健康男性的血小板一個治療量,約250ml／袋,每一袋無菌分裝于五個血小

4、板專業(yè)保存袋中(共30袋),分為A、B、C、D、E五個組,ABCD為實驗組,E組為對照組。向各組中每一袋血小板加入不同濃度的VitB6各5ml,其最終濃度依次為A組0.5mmol／L、B組1mmol／L、C組2mmol／L、D組4mmol／,E組為等量的生理鹽水。放于22±2℃的血小板振蕩保存箱內(nèi)保存。2.分別在血小板保存的0d、1d、3d、5d共4個時相抽取血小板10ml,每次抽取完后用熱合儀熱合管道。抽取出的血小板用于測定血小板聚集

5、率(platelet aggregation,PAgT％),可溶性P-選擇素(Soluble P-selectin,sCD62p)濃度變化,NO(nitric oxide)含量,PI3K(phosphatidylinositol3-kinase)活性,cGMP(3’-5'-cyclic guanosine monophosphate)活性,血小板的計數(shù)(platelet count,PLT)、血小板濃縮液乳酸脫氫酶(lactatedeh

6、ydrogenase,LDH)和葡萄糖(glucose,GLU)含量,血小板濃縮液的血小板平均體積(mean platelet volume,MPV)和血小板分布寬度(platelet distribution width,PDW)以及血小板顯微形態(tài)變化。
　　 結(jié)果:1.臨床各指標:血小板計數(shù)和葡萄糖含量都隨保存時間的延長而降低,乳酸脫氫酶含量隨著保存時間增加而增加,但實驗組與對照組變化趨勢不是很明顯,不同測量時間(同一組內(nèi))

7、的效應(yīng)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),同一時間點不同濃度組(組間)之間的效應(yīng)差異也無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。2.血小板聚集功能:實驗組與對照組都隨保存期延長逐漸降低,C組變化趨勢最小,E組變化趨勢最大。不同測量時間(同一實驗組內(nèi))的效應(yīng)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),對照組不同時間的效應(yīng)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),同一時間點(1d、3d、5d三個時相)不同濃度組之間的效應(yīng)差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3.sCD62p

8、、cGMP、PI3K、NO濃度變化:sCD62p濃度隨著保存時間的延長而增加,C組變化趨勢最小,E組變化趨勢最大。cGMP、PI3K、NO隨著保存時間延長實驗組先升高,到3d后開始下降,其中C組變化趨勢最大,不同時間的效應(yīng)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),同一時間點(1d、3d、5d三個時相)不同濃度組之間的效應(yīng)差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而對照組cGMP、PI3K濃度沒有什么變化,不同時間的效應(yīng)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)

9、,NO隨著保存時間延長而下降,不同測量時間的效應(yīng)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。4.血小板形態(tài)變化:①用包埋切片法在血小板電鏡下觀察保存期間內(nèi)形態(tài)變化,選用VitB6濃度為2mmol／L為實驗組和對照組比較,可見保存1天和3天后的血小板內(nèi)部結(jié)構(gòu)基本正常,a顆粒、致密顆粒、溶酶體、開放小管系均正常,兩組變化不大。保存5天的對照組與實驗組相比,對照組血小板部分出現(xiàn)形態(tài)改變,偽足狀突起,即樹突型血小板,開放小管增多,血小板聚集在一起,與實驗

10、組對比有差異。②血小板分布寬度和血小板平均體積變化:實驗組和對照組在血小板保存期內(nèi)變化不明顯,同一組別和同一時間點內(nèi)各組變化不明顯,無顯著統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論:1.血小板保存期間,隨著保存時間的延長,其形態(tài)和功能發(fā)生了不利的變化,特別是隨著保存時間的延長血小板聚集率的下降和血小板被活化,導致臨床上血小板輸注無效。2.VitB6在濃度為0.5mmol／L-4mmol／L時成濃度依賴性的抑制血小板聚集和活化,其中