APS的提取分離純化及其對(duì)小鼠外周血WBC、LC數(shù)量影響的研究.pdf

1、目的：由于提取分離純化的方法不同得到的多糖的性質(zhì)可能不同，不同分子量的多糖可能具有不同的藥理活性。雖然當(dāng)歸多糖(angelicapolysaccharides,APS)的研究已有報(bào)道，但本課題選用傳統(tǒng)中藥中國(guó)當(dāng)歸(AngelicasinensisDiels)，在傳統(tǒng)提取方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，并對(duì)工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳的提取、分離純化工藝，得到一種中性APS；對(duì)該成分進(jìn)行了含量、理化性質(zhì)和紅外分析，并研究APS對(duì)小鼠外周血白血細(xì)胞(Wh

2、itebloodcell,WBC)、淋巴細(xì)胞(1ymphocyte,LC)數(shù)量的影響，為進(jìn)一步研究APS對(duì)小鼠造血干／祖細(xì)胞(hematopoieticstemprogenitor,HSPC)的動(dòng)員作用提供理論指導(dǎo)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：本研究在傳統(tǒng)提取方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，直接用蒸餾水提取，以所得中性APS的質(zhì)量為指標(biāo)，按L9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)，對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化；采用乙醇(Ethanol，EtOH)沉淀APS，飽和氫氧化鈣(C

3、alciumhydroxide，Ca(OH)2)除蛋白，經(jīng)強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂(StrongacidiccationexchangeResin，SACER)和強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂(Strongbasicanionexchangeresin，SBAER)進(jìn)一步分離純化，最后透析純化，以所得中性APS的純度為指標(biāo)，對(duì)這些分離、純化條件進(jìn)行優(yōu)化；采用改良H2S04-苯酚法測(cè)定APS的含量，對(duì)測(cè)定條件進(jìn)行優(yōu)化；用自動(dòng)旋光儀測(cè)定旋光度；在200～

4、400nm進(jìn)行紫外掃描檢測(cè)AP$是否含有蛋白質(zhì)、多肽及核酸；在紅外分光光度計(jì)400～4000cm-1中紅外區(qū)進(jìn)行掃描，測(cè)定透光率曲線；采用外周血WBC、LC計(jì)數(shù)法，研究APS對(duì)小鼠外周血WBC、LC數(shù)的影響。 結(jié)果：研究結(jié)果表明最佳提取條件為：用10倍量的蒸餾水(即每100g的當(dāng)歸用1000ml的蒸餾水)提取，每次提取2h，共提取3次；最佳的分離純化條件是：濃縮液醇沉后；用飽和Ca(OH)2除雜質(zhì)時(shí)加入飽和Ca(OH)2至溶液的

5、pHlO；SACER進(jìn)行分離純化時(shí)溶液的pH值應(yīng)調(diào)節(jié)至3～4，SBAER進(jìn)行分離純化時(shí)溶液的pH值應(yīng)調(diào)節(jié)至10～11；透析袋透析時(shí)間為3天；采用硫酸．苯酚法測(cè)定含量，測(cè)定波長(zhǎng)為490nm，濃H2S04的用量為6ml，5％苯酚的用量為lml，顯色時(shí)間為30min，測(cè)定結(jié)果表明APS的含量為：92．80％；旋光度測(cè)定APS的比旋度[Qr。=-30，表明APS的糖苷鍵為p構(gòu)型；紫外光譜(Ultravioletspectrum，UV)顯示表明A

6、P$在206nm處有最大吸收峰，表明被測(cè)物為多糖，280、260nm處無(wú)吸收，說(shuō)明多糖中無(wú)蛋白質(zhì)、多肽及核酸；紅外光譜(Infraredspectrum，工R)表明，樣品具有典型的多糖特征吸收峰(3419、2937、1638、1418、¨16、619cm-1)；結(jié)果顯示APS組小鼠外周血WBC、LC數(shù)明顯高于NS組(P<0．05)。 結(jié)論：本研究采用的提取，分離，純化方法簡(jiǎn)單易行，所得到的中性APS純度高，是普通實(shí)驗(yàn)室都能進(jìn)行的