CE對IBO致癡呆大鼠的藥效學(xué)及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、老年性癡呆癥亦稱阿爾茨海默病(AD)，是一種以記憶減退，認(rèn)知障礙，人格改變?yōu)樘卣鞯哪X退行性疾病。皮質(zhì)、海馬神經(jīng)元丟失是AD的主要病理特征之一。AD是老年人群中進(jìn)行性癡呆的最主要原因，隨著人口老齡化，老年癡呆癥的危害性日益嚴(yán)重。目前，臨床上尚無特效藥物治療認(rèn)知障礙。該病病因仍不十分清楚，目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為中樞膽堿能神經(jīng)元的變性是造成AD病人認(rèn)知記憶障礙的重要因素。 本組在研究中藥治療老年性癡呆時(shí)，發(fā)現(xiàn)長苞凹舌蘭提取物CE，可以改善多

2、種擬癡呆模型小鼠、大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙。本實(shí)驗(yàn)采用立體定位技術(shù)將鵝蒿蕈氨酸(IBO)注射入Meynert基底核(nbM)建立膽堿能損傷擬癡呆大鼠模型，用避暗實(shí)驗(yàn)和跳臺實(shí)驗(yàn)測試大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，以觀察CE對學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用。為探討CE的作用機(jī)制，同時(shí)觀察了CE對IBO誘導(dǎo)癡呆大鼠的體重、神經(jīng)元形態(tài)、膽堿能系統(tǒng)相關(guān)酶的活性和表達(dá)等方面變化的影響。 SD大鼠隨機(jī)分為6組，每組13-14只，即假手術(shù)組、模型組、陽性對照藥腦復(fù)康治療

3、組(400mg/kg)、CE低劑量組(0.31mg/kg)、CE中劑量組(1.25mg/kg)、CE高劑量組(5mg/kg)，手術(shù)前一個(gè)小時(shí)灌胃試驗(yàn)用藥，術(shù)后每日灌藥一次。術(shù)后22天開始行為學(xué)測試，避暗實(shí)驗(yàn)記錄大鼠從明室進(jìn)入暗室的時(shí)間即潛伏期；跳臺實(shí)驗(yàn)記錄大鼠第一次跳下平臺的時(shí)間。 在避暗訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)中，各組大鼠表現(xiàn)出相同的嗜暗習(xí)性。但24小時(shí)后的記憶維持實(shí)驗(yàn)測試中，IBO損害組大鼠的潛伏期明顯比假手術(shù)組縮短，說明大鼠雙側(cè)nbM注射

4、IBO的確可導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。而CE能明顯改善IBO誘導(dǎo)癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。 跳臺實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠第一次跳下平臺的時(shí)間明顯縮短，說明IBO已造成大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。CE能明顯改善IBO誘導(dǎo)癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙。 到目前為止，經(jīng)美國食品與藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)的治療AD的藥物均為膽堿酯酶抑制劑。但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CE對額葉皮層和基底前腦乙酰膽堿酯酶(AChE)的活性影響不大。提示CE改善IBO誘導(dǎo)癡呆大鼠

5、學(xué)習(xí)記憶障礙的機(jī)制可能不是通過抑制乙酰膽堿酯酶的活性來實(shí)現(xiàn)的。但CE對基底前腦的膽堿酯酶(ChE)的活性有降低的趨勢。推測CE可能對腦內(nèi)丁酰膽堿酯酶有抑制作用，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果還需要進(jìn)一步研究證實(shí)。 膽堿乙?；?ChAT)是ACh的合成酶，有研究顯示，調(diào)控ChAT的活性可以調(diào)節(jié)乙酰膽堿的合成。對大鼠腦內(nèi)ChAT活性的檢測顯示，CE高劑量組大鼠皮層ChAT活性增強(qiáng)，與模型組5.22±0.54nmol/mgprot./min比，改善率約

6、為69％，提示CE改善學(xué)習(xí)記憶障礙的機(jī)制可能是提高腦內(nèi)ChAT的活性。 HE染色結(jié)果顯示，IBO誘導(dǎo)癡呆大鼠額葉皮層細(xì)胞大部分萎縮，染色加深，排列稀疏；基底前腦針道部位細(xì)胞大部分壞死，染色加深，壞死細(xì)胞周圍可見大量的膠質(zhì)細(xì)胞增生。表明模型組大鼠膽堿能神經(jīng)元受損，這是學(xué)習(xí)記憶障礙的病理基礎(chǔ)。CE在一定程度上可以抑制這種病理改變。尼氏小體染色結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，CE在一定程度上可以使IBO誘導(dǎo)癡呆大鼠基底前腦受損的神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)的尼氏小體

7、恢復(fù)正常。 文獻(xiàn)報(bào)道AD患者基底前腦的膽堿能神經(jīng)細(xì)胞明顯丟失，膽堿能神經(jīng)纖維發(fā)生退變，ChAT和AChE在腦內(nèi)表達(dá)出現(xiàn)異常，尤以皮質(zhì)顯著。應(yīng)用免疫組化染色方法，研究結(jié)果提示CE改善IBO誘導(dǎo)癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的另一條途徑可能是增加額葉皮層和基底前腦ChAT和AChE表達(dá)。 己有實(shí)驗(yàn)證明神經(jīng)生長因子(NGF)與膽堿能神經(jīng)支配有關(guān)，它對基底前腦神經(jīng)元發(fā)揮營養(yǎng)作用。應(yīng)用NGF抗體對海馬部位進(jìn)行免疫組化染色，結(jié)果提示CE可能是

8、通過增加海馬NGF的表達(dá)來改善大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的，CE對膽堿能神經(jīng)元具有一定的保護(hù)作用(CE高劑量組NGF陽性細(xì)胞數(shù)目和染色面積增加，與模型組比，P值均小于0.05，NGF陽性細(xì)胞累積光密度有增加的趨勢)。 結(jié)論：CE可有效改善IBO誘導(dǎo)癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙，其作用機(jī)制可能至少通過以下三種途徑： ①提高皮層乙酰膽堿合成酶ChAT的活性； ②增強(qiáng)皮層和基底前腦ChAT和AChE的表達(dá)； ③增強(qiáng)海馬區(qū)NGF的