腎衰養(yǎng)真顆粒對(duì)CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠的藥效學(xué)研究.pdf

1、研究背景：
　　 營(yíng)養(yǎng)不良是慢性腎衰竭(chronic renal failure,CRF)臨床常見的重要并發(fā)癥,盡管腎臟替代治療在不斷發(fā)展,但終末期腎臟疾病(ESRD)患者的死亡率仍然很高,而且在眾多死亡因素中,營(yíng)養(yǎng)不良占重要地位。據(jù)統(tǒng)計(jì),在ESRD患者群中,營(yíng)養(yǎng)不良發(fā)生率約為20％～50％[1]。營(yíng)養(yǎng)不良可以導(dǎo)致患者免疫功能低下、貧血、頻發(fā)感染,甚至導(dǎo)致多臟器衰竭,其發(fā)生不僅影響CRF患者的預(yù)后,而且與其病死率增高有關(guān)[2]

2、。引起CRF營(yíng)養(yǎng)不良的因?yàn)楹芏?主要包括以下幾個(gè)方面:1.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入減少；2.代謝及內(nèi)分泌紊亂:因尿毒癥毒素、代謝性酸中毒、內(nèi)分泌紊亂、炎癥、脂質(zhì)代謝紊亂等引起的蛋白質(zhì)分解增加與合成減少；3.CRF貧血:4.透析過程中丟失蛋白質(zhì)和氨基酸[3]。隨著透析技術(shù)的日益改進(jìn)和完善,維持性透析病人增加,CRF營(yíng)養(yǎng)不良的發(fā)生率進(jìn)一步提高。目前臨床上常使用α-酮酸(商品名:開同)進(jìn)行治療,但其價(jià)格昂貴,難以普遍應(yīng)用。其它治療如靜滴白蛋白、能量合劑、

3、水溶性維生素,注射重組生長(zhǎng)激素等,療效短暫且有限,并不能從木質(zhì)上改善CRF患者的蛋白質(zhì)合成,使用受限。傳統(tǒng)的中藥復(fù)方湯劑有不同程度的改善CRF營(yíng)養(yǎng)不良的作用,但服用不方便,療效不統(tǒng)一,質(zhì)量難以控制。而且至今為止,國(guó)內(nèi)尚無治療CRF營(yíng)養(yǎng)不良的中藥新藥問世。因此,開發(fā)有效的防治CRF營(yíng)養(yǎng)不良的藥物,具有十分重要的社會(huì)價(jià)值和意義,其潛在的市場(chǎng)和經(jīng)濟(jì)效益也相當(dāng)可觀。
　　 祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為,CRF營(yíng)養(yǎng)不良其病機(jī)屬于脾。腎衰敗,氣血虧虛,濁毒

4、內(nèi)阻。在治療上若單純益氣養(yǎng)血,則有助邪礙脾,關(guān)門留寇之弊,若單純逐瘀降濁,則又耗傷正氣,損傷脾胃,故須降濁排毒與益氣養(yǎng)血并用,攻補(bǔ)兼施,方奏氣血雙補(bǔ)、通腑降濁之功。在此原則指導(dǎo)下,導(dǎo)師魏連波教授據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)在人參養(yǎng)榮湯基礎(chǔ)上篩選藥物組方,研制出治療CRF營(yíng)養(yǎng)不良的中藥新藥-腎衰養(yǎng)真顆粒,方由黃芪、白術(shù)、當(dāng)歸等六味中藥組成,有補(bǔ)益氣血、通腑降濁之用。我們前期臨床觀察已證明腎衰養(yǎng)真顆粒糾正CRF營(yíng)養(yǎng)不良的總有效率達(dá)81.7％,顯著優(yōu)于開同

5、對(duì)照組(有效率63.2％,P<0.01),并能很好的改善CRF貧血。因此,對(duì)其進(jìn)一步開發(fā)利用具有重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
　　 本課題擬按照中藥新藥6(1)類申報(bào)要求,通過建立兩種CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型,研究腎衰養(yǎng)真顆粒對(duì)模型大鼠的腎臟保護(hù)作用及營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的改善作用,從而完成腎衰養(yǎng)真顆粒治療兩種CRF營(yíng)養(yǎng)不良模型大鼠的主要藥效學(xué)研究。
　　 目的：
　　 1.建立5/6腎切除CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型及腺嘌呤CRF營(yíng)

6、養(yǎng)不良大鼠模型,動(dòng)態(tài)觀察兩種模型CRF營(yíng)養(yǎng)不良的發(fā)生時(shí)間和營(yíng)養(yǎng)狀況；
　　 2.觀察CRF營(yíng)養(yǎng)不良模型大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24h尿蛋白(24hUpro)等腎功能指標(biāo)及血紅蛋白(Hb)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)、促紅細(xì)胞生成素(EPO)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)、甲狀旁腺激素(PTH)等相關(guān)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的變化,以及腎衰養(yǎng)真顆粒對(duì)上述指標(biāo)的影響,探討其改善CRF營(yíng)養(yǎng)不良的作用機(jī)制,

7、從而按照中藥新藥分類6.1的技術(shù)要求,完成其主要藥效學(xué)研究。
　　 方法
　　 制備兩種CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型。模型一:采用5/6腎切除聯(lián)合4％酪蛋白飼料喂養(yǎng)制作5/6腎切除CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型；模型二:用含0.5％腺嘌呤加4％酪蛋白的飼料喂養(yǎng)制作腺嘌呤CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型。動(dòng)態(tài)觀察兩種模型CRF營(yíng)養(yǎng)不良的發(fā)生時(shí)間和相關(guān)指標(biāo)的變化,符合CRF營(yíng)養(yǎng)不良模型條件的大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、開同(KT)陽性對(duì)照組

8、、腎衰養(yǎng)真湯劑對(duì)照組和腎衰養(yǎng)真顆粒(SSYZ)高、中、低劑量組。給藥治療8周,觀察大鼠的一般狀況、體重、攝食,檢測(cè)紅細(xì)胞(RBC)計(jì)數(shù)、Hb、紅細(xì)胞比積(Hct)、24hUPro、Scr、BUN、ALB、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、甘油三脂(TG)、PA、IGF-1、EPO、Tf、PTH及血鉀(K)、鈉(Na)、鈣(Ca)、磷(P)的含量,留取大鼠腎臟,觀察大鼠腎臟外觀,光鏡(H

9、E染色)觀察腎組織病理學(xué)改變。
　　 結(jié)果
　　 1.兩種模型制備情況5/6腎切除CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型造模8周末,47只大鼠符合CRF營(yíng)養(yǎng)不良模型,檢測(cè)Scr:(123.43±18.00)μmol/L,BUN:(23.68±5.65)mmol/L,24Upro:(62.91±5.12)mg/24h,ALB:(30.02±1.79)g/L,體重:(328.04±35.62)g,與正常組體重(418.50±31.97)g比

10、較平均減少20％以上。造模過程中共死亡29只,存活率為61.84％。腺嘌呤致CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型造模8周末,62只大鼠符合CRF營(yíng)養(yǎng)不良模型,檢測(cè)Scr:(113.02±17.27)μmol/L,BUN:(28.30±4.34)mmol/L,24Upro:(68.65±5.79)mg/24h,ALB:(29.38±2.74)g/L,體重:(276.45±32.26)g,與正常組體重(418.50±31.97)g比較平均減少20％以上。

11、造模過程中共死亡14只,存活率為81.58％。兩種模型制備過程中,正常組大鼠精神狀況良好,活潑好動(dòng),反應(yīng)靈敏,毛色潤(rùn)澤,食欲良好,尿量正常,體重逐漸增加。CRF營(yíng)養(yǎng)不良模型大鼠精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,毛豎枯槁無光澤,動(dòng)作遲緩,弓背蜷體震顫,食欲減退,尿量減少,體重增加緩慢,與正常組之間差異顯著(P<0.05)。
　　 2.干預(yù)后各組一般狀況的比較 干預(yù)8周末,兩種模型均見:與模型組比較,各治療組大鼠一般狀況顯著改善,體重亦顯著增加(

12、P<0.05)。
　　 3.各組腎功能指標(biāo)的比較 兩種模型均見:干預(yù)8周末,與模型組相比,各治療組大鼠24hUPro、Scr、BUN均顯著降低(P<0.05)；在5/6腎切除致CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型中:與KT組相比,SSYZ各劑量組及湯劑組大鼠24hUPro、BUN水平無顯著差異(P>0.05),而Scr水平顯著低于KT組(P<0.05)；在腺嘌呤致CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型中:與KT組相比,SSYZ中劑量組大鼠24hUPro、Sc

13、r水平顯著低于KT組(P<0.05),SSYZ高劑量組Scr水平亦顯著低于KT組,其余各組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。SSYZ低劑量組與湯劑組大鼠BUN水平顯著高于KT組(P<0.05),余各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4.各組營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的比較
　　 在5/6腎切除CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型中:與模型組相比,SSYZ各劑量組與湯劑組RBC計(jì)數(shù)均顯著增加(P<0.05),而KT組未見顯著增加；各治療組大鼠Hb、Hct、ALB、PA、IGF-

14、1、EPO、Tf水平均顯著高于模型組(P<0.05),PTH顯著降低(P<0.05),各治療組大鼠血脂水平及電解質(zhì)水平亦較模型組顯著改善。
　　 在腺嘌呤CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型中:與模型組相比,各治療組大鼠血RBC計(jì)數(shù)、Hb、Hct、ALB、PA、IGF-1、EPO、Tf水平均顯著優(yōu)于模型組(P<0.05),PTH顯著降低,各治療組大鼠血脂水平及電解質(zhì)水平亦較模型組改善顯著。
　　 5.各組腎臟病理變化的比較
　　

15、 在5/6腎切除CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型中:正常組腎小球、腎小管及間質(zhì)結(jié)構(gòu)清晰,排列分布及形態(tài)正常。模型組大鼠腎小球代償件肥大,可見較多腎小球呈節(jié)段性硬化,系膜增寬:部分腎小管擴(kuò)張,變性,壞死,脫落；間質(zhì)呈慢性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。各治療組也見部分腎小球肥大,腎小球基底膜(glomerularbasement membrance,GBM)增厚,腎小球系膜增寬,但病變范圍小且較輕,部分腎小球局灶性硬化,腎小管上皮細(xì)胞部分脫落,間質(zhì)見少量淋巴細(xì)胞浸

16、潤(rùn),腎小管損害明顯減輕。各治療組中SSYZ高中劑量效果較SSYZ低劑量及湯劑組為好,KT組效果不及SSYZ中劑量組。
　　 結(jié)論
　　 本課題通過5/6腎切除法和腺嘌呤法,配合4％酪蛋白飼料喂養(yǎng)制備了兩種CRF營(yíng)養(yǎng)不良大鼠模型。本實(shí)驗(yàn)中觀察到:造模8周末,各造模大鼠與正常組相比,體重顯著減輕,ALB顯著下降,24hUpro、BUN、Scr顯著升高,提示已符合CRF營(yíng)養(yǎng)不良模型。在干預(yù)過程中,兩種模型均可觀察到:與正常組比

17、較,模型對(duì)照組大鼠一般狀況明顯較差,體重顯著下降,24hUpro、BUN、Scr水平持續(xù)升高,RBC計(jì)數(shù)、Hb、Hct、ALB、PA、IGF-1、EPO、Tf等營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)顯著降低,血脂代謝及電解質(zhì)紊亂,存在低鈣、高磷及高PTH血癥,腎臟病理可見腎小球硬化、壞死,說明CRF大鼠存在著:營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入減少、繼發(fā)性甲旁亢、CRF貧血以及因尿毒癥毒素、代謝件酸中毒、內(nèi)分泌紊亂、炎癥、脂質(zhì)代謝紊亂等引起的蛋白質(zhì)分解增加與合成減少,上述各種因素相互作用

18、導(dǎo)致了CRF營(yíng)養(yǎng)不良的發(fā)生。而各組干預(yù)后,發(fā)現(xiàn)SSYZ可顯著改善大鼠營(yíng)養(yǎng)狀況,降低24hUpro、BUN、Scr水平,升高RBC計(jì)數(shù)、Hb、Hct、ALB、PA、IGF-1、EPO、Tf水平,降低血清K、Na、P及PTH水平,升高血Ca,改善血脂水平,減輕腎臟組織病理損害,同時(shí)與開同作對(duì)照,結(jié)果說明了腎衰養(yǎng)真顆粒對(duì)CRF營(yíng)養(yǎng)不良的療效確切,其作用機(jī)制可能通過多途徑、多靶點(diǎn)起作用的,療效更優(yōu)于原湯劑劑型,所以通過對(duì)SSYZ的進(jìn)一步開發(fā)利用