BacopasideⅠ抗抑郁及抗老年癡呆的藥效及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：評價(jià)從植物假馬齒莧中提取的單體化合物bacopasideⅠ的抗抑郁、抗老年癡呆的藥效，并分別探討其改善抑郁及老年癡呆癥的作用機(jī)制。
　　 方法：1.抑郁癥模型
　　 模型組與藥物處理組分別預(yù)防給予溶劑及bacopasideⅠ6天，然后采用小鼠強(qiáng)迫游泳(FTS)、小鼠懸尾(TST)及小鼠自發(fā)活動(dòng)三個(gè)經(jīng)典抑郁動(dòng)物篩選模型評價(jià)bacopasideⅠ的抗抑郁藥效，同時(shí)測定小鼠腦內(nèi)單胺氧化酶(MAOs)及氧化應(yīng)激(ROS)酶

2、；利用藥物誘發(fā)的抑郁動(dòng)物模型-利血平誘導(dǎo)的抑郁模型及小鼠增強(qiáng)5-羥色胺酸(5-HTP)的作用模型，探討bacopasideⅠ治療抑郁的作用機(jī)制。
　　 2.老年癡呆癥的方法
　　 首先采用經(jīng)典的學(xué)習(xí)記憶篩選平臺(tái)-Morris水迷宮評價(jià)化合物bacopasideⅠ是否具有改善由東莨菪堿所致小鼠記憶獲得障礙的作用。老年癡呆癥主要分為兩種(1)血管性癡呆(VD)；采用SD大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型模擬臨床血管性癡呆疾病(V

3、D)，化合物bacopasideⅠ預(yù)防給藥3天(假手術(shù)組及模型組每天灌于同劑量的相同溶劑)，手術(shù)造模后治療3天，然后進(jìn)行神經(jīng)功能評分，腦缺血體積比較，病理切片觀察等，并測定腦內(nèi)抗氧化應(yīng)激(ROS)酶，能量代謝酶以及離子通道能量代謝酶，研究bacopasideⅠ防治血管性癡呆(VD)的藥效及作用機(jī)制。(2)阿爾茨海默癥；采用APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病模型小鼠(6-8月齡)，在小鼠6月齡時(shí)開始給藥(空白組及模型組每天灌于同劑量的相同

4、溶劑)，連續(xù)不間斷給藥60天，運(yùn)用Morris水迷宮評價(jià)bacopasideⅠ對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠學(xué)習(xí)與記憶能力的改善作用；運(yùn)用尼氏染色觀察腦內(nèi)神經(jīng)元尼氏小體形態(tài)、運(yùn)用硫磺素染色觀察腦內(nèi)Aβ老年斑沉積情況；同時(shí)測定小鼠腦內(nèi)乙酰膽堿酶，β分泌酶的活性，腦內(nèi)抗氧化應(yīng)激酶活力，采用蛋白質(zhì)組學(xué)與基因組學(xué)技術(shù)手段探討bacopasideⅠ防治APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的機(jī)制，尋找作用通路或靶點(diǎn)。
　　 結(jié)果：1.治療抑郁癥的結(jié)

5、果
　　 相比模型組，我們發(fā)現(xiàn)bacopasideⅠ(50、15、5mgkg-1)均能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳及小鼠懸尾抑郁不動(dòng)時(shí)間，其中15mgkg-1劑量組減少小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間最為明顯(P<0.01)；且各劑量組均不影響小鼠的自主活動(dòng)(P>0.05)；在機(jī)制研究方面，我們發(fā)現(xiàn)bacopasideⅠ(50、15、5mgkg-1)均能改善腦內(nèi)抗氧化應(yīng)激(ROS)酶如超氧歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶GSH-P

6、x的活性，且bacopasideⅠ5mgkg-1改善SOD作用最強(qiáng)(P<0.01)、bacopasideⅠ5mgkg-1改善CAT作用最強(qiáng)(P<0.01)、bacopasideⅠ5mgkg-1改善GSH-Px作用最強(qiáng)(P<0.05)、在清除脂質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)物丙二醛(MDA)方面bacopasideⅠ15mgkg-1作用強(qiáng)度最為明顯(P<0.01)；在利血平誘導(dǎo)的體溫降低抑郁模型，與模型組比較，bacopasideⅠ(5、15mgkg-1)在注

7、射利血平3h后能顯著抑制體溫降低及降低眼瞼下垂評分的抑郁癥狀(P<0.01)，bacopasideⅠ(50mgkg-1)也能抑制體溫降低及降低眼瞼下垂評分的抑郁癥狀(P<0.05)；在小鼠增強(qiáng)5-HTP模型中，陽性藥氟西汀(Fluxetine)能明顯增強(qiáng)小鼠的甩頭行為(P<0.01)，bacopasideⅠ(50、15、5mgkg-1)各劑量組在增強(qiáng)小鼠甩頭行為方面沒有明顯作用(P>0.05)，采用生物方法或神經(jīng)生物檢測方法也未觀察到b

8、acopasideⅠ明顯抑制小鼠腦內(nèi)單胺氧化酶(MAO)的作用。
　　 2.防治老年癡呆癥的結(jié)果
　　 通過Morris水迷宮篩選平臺(tái)我們發(fā)現(xiàn)，化合物bacopasideⅠ各劑量組(150、50、15、5mgkg-1)都具有改善由東莨菪堿所致小鼠記憶獲得障礙的作用，且bacopasideⅠ(15mgkg-1)縮短小鼠尋找平臺(tái)的潛伏期最為明顯(P<0.01)，改善作用最強(qiáng)。(1)bacopasideⅠ在防治大鼠局灶性腦缺血

9、再灌注損傷模型中的作用bacopasideⅠ防治6天后，與模型組相比，bacopasideⅠ(30,10mgkg-1)能明顯改善腦缺血損傷大鼠的神經(jīng)功能，降低缺血體積和改善腦水腫程度，改善腦內(nèi)海馬及大腦皮層的病理狀況，其中bacopasideⅠ(10mgkg-1)作用強(qiáng)度最為明顯。此外在作用機(jī)制方面，bacopasideⅠ能提高腦內(nèi)抗氧化應(yīng)激酶活性；相比模型組，bacopasideⅠ(10mgkg-1)顯著地提高抗氧化應(yīng)激酶活性如SOD

10、(P<0.01)，GSH-Px(P<0.01)與CAT(P<0.01)的活性，也觀察到bacopasideⅠ(30mgkg-1，i.g.)提高了GSH-Px(P<0.05)、CAT(P<0.05)及SOD的活性，但改善SOD活性方面沒有顯現(xiàn)出顯著性差異(P>0.05)；bacopasideⅠ(3，10,30mgkg-1，i.g.)還劑量依賴性地減少了腦內(nèi)脂質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)物丙二醛(MDA)并在治療3天后促進(jìn)了腦內(nèi)擴(kuò)張血管因子NO的生成；在改善能

11、量代謝方面；模型組大鼠中的ATP、ADP、TAN和EC的含量分別為假手術(shù)組中的39％、56％、69％和59％；采用bacopasideⅠ(3，10,30mgkg-1，i.g.)治療后，與模型組比較，TAN升高了8、21、2％，EC升高了60、66、36％，ATP水平也提高到假手術(shù)組的71、84、55％；我們還發(fā)現(xiàn)，bacopasideⅠ(3，10,30mgkg-1，i.g.)顯著性的改善了再灌注損傷大鼠腦內(nèi)的Na+K+ATPase活性(

12、30,68，100％)與Ca2+Mg2+ATPase的活性(36，47，41％)，與模型組比較差異具有顯著性(P<0.01)。(2)bacopasideⅠ在治療APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因模型阿爾茨海默小鼠中的作用阿爾茨海默小鼠連續(xù)治療給藥60天后，通過Morris水迷宮測試平臺(tái)我們發(fā)現(xiàn)，野生型正常小鼠(wild-typemouse)在6天訓(xùn)練期間尋找到平臺(tái)的潛伏期越來越短，APP/PS1模型組小鼠尋找到平臺(tái)的潛伏期也有所降低，但降低程度不明

13、顯，bacopasideⅠ(15，50mgkg-1，i.g.)組的小鼠尋找到平臺(tái)的潛伏期明顯減少，且bacopasideⅠ(15mgkg-1，i.g.)(P<0.01)劑量組減少程度最為明顯，bacopasideⅠ(50mgkg-1，i.g.)(P<0.05)改善作用次之。第7天撤去平臺(tái)，進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶獲得障礙試驗(yàn)時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)與模型組相比，bacopasideⅠ(15，50mgkg-1，i.g.)組小鼠穿越平臺(tái)所在位置的次數(shù)與平臺(tái)所在象限

14、游泳路程都明顯增加；隨后我們對小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元尼氏體及神經(jīng)元老年斑塊進(jìn)行染色，發(fā)現(xiàn)模型組小鼠腦內(nèi)尼氏體萎縮、損傷，而受試藥物bacopasideⅠ(15，50mgkg-1，i.g.)組相比模型組得到一定程度的保護(hù)，同時(shí)通過硫磺素染色發(fā)現(xiàn)受試藥物bacopasideⅠ(15，50mgkg-1，i.g.)組腦內(nèi)老年斑塊沉積有所改善，但與模型組比較這種改善程度的差異性沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；為闡明bacopasideⅠ的作用機(jī)制，我們還發(fā)現(xiàn)bacopa

15、sideⅠ(15，50mgkg-1，i.g.)均能有效的改善小鼠腦內(nèi)SOD(P<0.05，P<0.05)、CAT(P<0.01，P<0.01)、GSH-Px(P<0.01，P<0.05)等抗氧化應(yīng)激酶活性，相比模型組亦能降低腦內(nèi)脂質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)物MDA(P<0.05，P<0.05)；另外，通過測試發(fā)現(xiàn)排除了bacopasideⅠ對乙酰膽堿酯酶及β分泌酶的作用(P>0.05)；為進(jìn)一步尋求bacopasideⅠ的作用機(jī)制，我們采用了基于二維凝膠

16、電泳技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)和基因芯片組學(xué)技術(shù)尋找bacopasideⅠ防治阿爾茨海默病的作用通路或靶點(diǎn)。
　　 結(jié)論：1.治療抑郁癥結(jié)論
　　 bacopasideⅠ具有明顯的抗抑郁樣作用，其作用可能與以下機(jī)制有關(guān)：
　　 1)涉及去甲腎上腺素系統(tǒng)，提高腦內(nèi)NE、DA的水平。
　　 2)改善腦內(nèi)抗氧化應(yīng)激酶活性。
　　 3)可能不涉及5-羥色胺能系統(tǒng)而發(fā)揮作用。
　　 4)可能不通過抑制腦內(nèi)單胺

17、氧化酶(MAO)活性發(fā)揮作用。
　　 2.治療老年癡呆癥結(jié)論
　　 (1)bacopasideⅠ對局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠具有防治作用，其作用可能與以下機(jī)制有關(guān)：
　　 1)提高腦內(nèi)抗氧化應(yīng)激酶活性。
　　 2)清除腦內(nèi)脂質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)物MDA及增加腦血管擴(kuò)張因子NO的含量。
　　 3)改善損傷大鼠腦內(nèi)的能量代謝及腦內(nèi)能量代謝相關(guān)酶。
　　 (2)bacopasideⅠ具有改善APP/PS1雙