CHB患者外周血IL-35的表達及其與Treg細胞之間的關系.pdf

1、目的：1.通過檢測慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血白細胞介素-35(IL-35)的表達水平，探討IL-35在CHB患者外周血中的表達水平及其與肝功能之間的關系。
　　2.通過分析CHB患者外周血單個核細胞(PBMC)中IL-35兩個亞基EBI3和IL-12p35與Foxp3 mRNA表達水平之間的相關關系，明確IL-35與調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)功能之間的關系。
　　3.通過磁珠分選獲得CD4+CD25+Treg和CD4+C

2、D25-T細胞并刺激不同的時間，明確IL-35是否由Treg細胞分泌及其不同活化狀態(tài)下IL-35表達水平的變化。
　　方法：1.采集125例慢性HBV感染者，其中包括27例慢性乙型重型肝炎(CSHB)、69例慢性乙型肝炎(CHB)、29無癥狀攜帶者(ASC)，26例正常對照(NC)外周血，留取血清，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測IL-35的表達水平，全自動生化儀檢測肝功能，半自動血凝儀檢測凝血功能，實時熒光定量PCR(RT-PC

3、R)檢測HBV DNA，分析慢性HBV感染者IL-35的表達水平，并與部分肝功能指標，PT及HBV DNA進行相關性分析。
　　2.采集20例CSHB、40例CHB、15例ASC和15例NC外周抗凝血3 ml，F(xiàn)icolli密度梯度離心法獲取PBMC，Trizol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進行實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測各組EBI3、IL-12p35及Foxp3的mRNA表達水平，并進行相關性分析。
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4、.磁珠分選獲得CD4+CD25+Treg和CD4+CD25·T細胞，加入抗CD3、抗CD28抗體和IL-2進行刺激，在不同的時間點(0、3、5、7天)，流式細胞術(FCM)檢測胞內(nèi)因子IL-12p35，RT-PCR檢測EBI3、IL-12p35、Foxp3、TGF-β和IL-10的mRNA表達水平，ELISA法檢測培養(yǎng)上清中細胞因子IL-35、IL-1O和TGF-β的表達水平，分析不同活化狀態(tài)下IL-35的表達水平變化情況。
　　

5、結(jié)果：1.慢性HBV感染者血清中IL-35的表達水平明顯高于NC(P<0.05)；CSHB、CHB、ASC和NC血清中IL-35的表達水平呈遞減趨勢，各組間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；血清中IL-35的表達水平與ALT、AST、TBIL和PT呈正相關，與ALB呈負相關(P<0.05)，與HBV DNA無明顯相關(P<0.05)。
　　2.CSHB患者EBI3、IL-12p35和Foxp3的mRNA表達水平高于CHB、ASC和

6、NC，CHB患者高于ASC和NC，ASC高于NC，各組間差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)：EBI3、IL-12p35與Foxp3的mRNA表達水平呈正相關，EBI3與IL-12p35的mRNA表達水平也呈正相關(P<0.05)。
　　3.未活化的CD4+CD25+Treg細胞表達少量的胞內(nèi)IL-12 p35，經(jīng)活化后(3、5、7天)其表達水平伴隨時間延長而升高(P<0.05)，未經(jīng)活化的CD4+CD25-T細胞表達少量的IL-1

7、2 p35，經(jīng)活化后其表達量無明顯變化(P>0.05)。
　　4.未活化和活化的CD4+CD25+Treg細胞均可檢測到EBI3、IL-12p35、Foxp3和IL-10、TGF-β mRNA，且其表達水平伴隨著活化時間延長而升高(P<0.05)。
　　5.活化的CD4+CD25+Treg細胞培養(yǎng)上清中IL-35、IL-10和TGF-β的表達水平伴隨著活化時間延長而升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.CHB患者外周血