IL-21在CHB患者Th17-Treg細胞失衡中的作用及機制初步研究.pdf

1、目的：
　　1.明確IL-21與CHB患者外周血中Th17/Treg細胞失衡之間的關系。
　　2.初步探討IL-21在CHB患者外周血中Th17/Treg細胞失衡中的作用機制。
　　方法：
　　1.IL-21與CHB患者外周血中Th17/Treg細胞失衡之間的關系
　　1.1收集慢乙肝患者(CHB)和健康對照者(HC)新鮮外周肝素抗凝血，流式細胞術檢測PBMCs中CD4+CD25highCD127lowTr

2、eg細胞頻數(shù)，細胞內(nèi)因子染色結合流式細胞術檢測Th17細胞頻數(shù)。
　　1.2收集慢乙肝患者(CHB)和健康對照者(HC)新鮮外周肝素抗凝血，留取血清，酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測各組血清中IL-21、IL-17、IL-10、TGF-β的濃度。
　　1.3 CHB及ACLF患者外周血Th17、Treg細胞頻數(shù)與IL-21濃度、部分肝功能指標、HBVDN

3、A等進行相關性分析。
　　2.IL-21在CHB患者外周血中Th17/Treg細胞失衡中的作用機制
　　2.1通過密度梯度離心法獲取CHB患者外周血PBMCs，實驗分為IL-21組、IL-2組、PBS組。調(diào)整IL-21終濃度為0.1μg/ml、IL-2終濃度為0.1μg/ml，IL-21共刺激48h。
　　2.2熒光實時定量PCR法檢測各組PBMCs RORγt和Foxp3 mRNA表達水平。
　　2.3 ELI

4、SA法檢測各組上清中IL-17、IL-10、TGF-β的濃度。
　　結果：
　　1.CHB患者Th17細胞頻數(shù)顯著高于HC組(P=0.001)，差異具有統(tǒng)計學意義。CHB患者Th17與Treg比值顯著高于HC組(P=0.000)，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　2.CHB患者外周血清IL-21濃度高于HC組(P=0.001)，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　3.CHB患者外周血清IL-21濃度與外周血Th17/Treg細胞呈

5、正相關(r=0.363，P=0.008)，并且CHB患者外周血清IL-21濃度與外周血Th17細胞頻數(shù)也呈正相關(r=0.380，P=0.005)，但IL-21濃度與外周血Treg細胞頻數(shù)無明顯相關(r=-0.012，P=0.935)。
　　4.CHB患者IL-17、TGF-β濃度均明顯高于HC組(P=0.002，P=0.030)，差異均有統(tǒng)計學意義。CHB患者IL-10濃度高于HC組，但差異不具有統(tǒng)計學意義。
　　5.CH

6、B患者外周血Th17細胞頻數(shù)與ALT呈正相關(r=0.289，P=0.038)，且Th17/Treg細胞與血清TBIL呈正相關(r=0.579，P=0.000)。
　　6.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)CHB患者外周血PBMCs加入IL-21刺激后RORγt的表達量顯著高于加入IL-2組和空白組(P=0.016，P=0.018)，而Treg細胞的轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達量低于IL-2組(P=0.043)，差異均有統(tǒng)計學意義;ELISA結果顯

7、示，加入IL-21后，CHB患者PBMCs培養(yǎng)上清中IL-17濃度顯著高于IL-2組和空白組(P=0.049，P=0.018)，但IL-10及TGF-β濃度低于IL-2組（P=0.017，P=0.045），差異均有統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1.CHB患者外周血中存在Th17/Treg失衡，外周血清IL-21水平升高，并與Th17/Treg和Th17呈正相關，提示IL-21可能是導致CHB患者Th17和Treg細胞比例失衡