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1、目的:分析高濃度葡萄糖對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2的生長(zhǎng)和增殖、遷移能力及凋亡的影響,及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)聯(lián),探討可能的作用機(jī)制。方法:用含不同葡萄糖濃度的DMEM培養(yǎng)HepG2細(xì)胞,設(shè)對(duì)照組(DMEM含糖濃度為5.5mmol/L)、高糖組(DMEM含糖濃度分別為25、40、100、150、200mmol/L)和甘露醇對(duì)照組(DMEM含糖濃度分別為5.5mmol/L+19.5、34.5、94.5、144.5、194.5mmol/L甘露醇),用
2、倒置顯微鏡和MTT觀察高濃度葡萄糖對(duì)HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖狀況;Hoechst染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)高濃度葡萄糖對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響;Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bak、Bax、p53、Grim19、Survinin和NF-κB的表達(dá)變化,并檢測(cè)Caspase3的活性;細(xì)胞劃痕檢測(cè)肝癌細(xì)胞株HepG2的生長(zhǎng)和遷移能力,Western blot分析MAPK相關(guān)信號(hào)通路蛋白PP38/p38和P-JNK/JNK
3、,以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白BIP和CHOP的表達(dá)變化。結(jié)果:高濃度葡萄糖能明顯抑制HepG2細(xì)胞的體外增殖且呈劑量依賴性;Hoechst染色和流式結(jié)果顯示高濃度葡萄糖能誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的凋亡,隨著葡萄糖濃度的升高凋亡現(xiàn)象越來越明顯,并且能下調(diào)抑制凋亡作用的蛋白Bcl-2和Survinin的表達(dá),上調(diào)促進(jìn)凋亡的蛋白Bak、Bax、p53、Grim19、NF-κB的表達(dá),Caspase3的活性也呈上升趨勢(shì);細(xì)胞劃痕結(jié)果顯示高濃度葡萄糖能明顯
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