化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)β-淀粉樣蛋白致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用清道夫受體Marco在α-synuclein引起神經(jīng)炎癥中的作用和機(jī)制研究.pdf

1、第一部分:化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)β-淀粉樣蛋白致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用
　　阿爾茲海默氏病(Alzheimer's disease，AD)是一種主要發(fā)生在老年人中的神經(jīng)退行性疾病，在老年癡呆中最為常見(jiàn)。近年來(lái)的研究表明，炎癥與AD發(fā)病關(guān)系密切。AD病變顯著特征是中晚期腦內(nèi)出現(xiàn)大量被β淀粉樣蛋白(β-amyloid protein，Aβ)激活的膠質(zhì)細(xì)胞，并伴有炎癥因子表達(dá)增加和補(bǔ)體系統(tǒng)的激活。化合物WYD1-8和WY

2、D7-6為間苯三酚類(lèi)衍生物，前期研究結(jié)果顯示W(wǎng)YD1-8和WYD7-6對(duì)Aβ和脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)刺激原代海馬混合培養(yǎng)體系引起的神經(jīng)炎癥具有明顯的抑制作用，對(duì)海馬神經(jīng)元具有明顯的保護(hù)作用。由此我們推測(cè)化合物WYD1-8和WYD7-6可能通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥而保護(hù)神經(jīng)元和治療AD。本研究采用側(cè)腦室注射Aβ1-42建立AD小鼠模型，研究化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用，并對(duì)相關(guān)機(jī)制進(jìn)

3、行探討。結(jié)果顯示，化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)側(cè)腦室注射Aβ1-42引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙具有明顯的改善作用，且可抑制乙酰膽堿酯酶(Acetylcholine esterase，AChE)，提高膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(Cholineacetyltransferase，ChAT)的活性和乙酰膽堿(Acetylcholine，ACh)的含量。化合物WYD1-8和WYD7-6可明顯抑制小鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，降低腫瘤壞死因子-α

4、（Tumornecrosis factor-α，TNF-α）、白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、環(huán)氧合酶2(Cyclooxygenase-2，Cox-2)的含量和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Inducible nitricoxide synthase，iNOS)的活性，提高超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)的活性。此外，化合物WYD1-8和WYD7-6還可抑制Bax，提高Bcl-2的表達(dá)和

5、抑制半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3（Cystein-asparate protease3，Caspase-3）的活化。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，Aβ引起抑制性κB(InhibitoryκB，IκB)和IκB激酶(IκBkinase，IKK)的磷酸化水平明顯提高，化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)其均具有明顯的抑制作用，同時(shí)也可明顯抑制核轉(zhuǎn)錄因子κB（Nuclear factor-kappa B，NF-κβ）p65亞基的核轉(zhuǎn)位?；衔颳YD1-8和WYD

6、7-6可明顯抑制Aβ引起的p38與c-Jun氨基末端激酶（C-Jun NH2-terminal kinase，JNK）的高磷酸化水平，而細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(Extracellular regulated kinase，ERK)的磷酸化水平?jīng)]有受到明顯影響，提示W(wǎng)YD1-8和WYD7-6可通過(guò)抑制NF-κB和JNK/p38 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而抑制炎癥。以上結(jié)果表明化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)Aβ引起的學(xué)習(xí)記憶障礙有明顯的改善作用

7、，這可能與其抑制神經(jīng)炎癥和神經(jīng)元凋亡有關(guān)。本研究表明化合物WYD1-8和WYD7-6是治療AD有良好前景的候選化合物。
　　第二部分:清道夫受體Marco在α-synuclein引起神經(jīng)炎癥中的作用和機(jī)制研究
　　帕金森氏病(Parkinson's disease，PD)是一種與衰老密切相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活引起的炎癥是PD發(fā)病的重要原因。星形膠質(zhì)細(xì)胞作為腦中數(shù)量最多的免疫細(xì)胞，可被α-突觸核蛋白（α-syn

8、uclein）等刺激因子激活，將感知的信號(hào)傳遞給神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞，在PD發(fā)生中處于重要地位。但α-synuclein介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞引起炎癥的機(jī)制尚不十分明確。清道夫受體Marco(Scavengerreceptor Marco，SR-Marco)在活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞膜上大量表達(dá)，可與Aβ、LPS等結(jié)合引起炎癥反應(yīng)。為此，我們推測(cè)α-synuclein激活星形膠質(zhì)細(xì)胞可能與SR-Marco有關(guān)。本研究用α-synuclein(A53T

9、)刺激原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞，觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化及SR-Marco在介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥中的作用，并對(duì)由此引起的相關(guān)炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化進(jìn)行探討。研究發(fā)現(xiàn)α-synuclein(A53T)刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞48h后，可明顯提高膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial fibrillary acid protein，GFAP）和SR-Marco的表達(dá)，TNF-α、IL-1β、Cox-2的含量和iNOS的活性也明顯提高。通過(guò)SR-Marco小干擾

10、RNA（Small interfering RNA，siRNA）沉默SR-Marco后，GFAP的表達(dá)明顯降低，TNF-α、IL-1β、Cox-2的含量和iNOS的活性也明顯降低。我們進(jìn)一步對(duì)相關(guān)的炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)α-synuclein(A53T)刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞引起IKK和IκB的磷酸化、NF-κB p65亞基的轉(zhuǎn)位入核均明顯提高，提示NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化。同時(shí)Janus激酶2(Janus kinase2，JAK

11、2)的表達(dá)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子和轉(zhuǎn)錄活化子3(Signal transducer and transcription activator3，STAT3)的磷酸化也明顯提高。沉默SR-Marco后，NF-κB和JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受到明顯抑制。綜上所述，SR-Marco參與了α-synuclein激活星形膠質(zhì)細(xì)胞引起的神經(jīng)炎癥，提示SR-Marco可能是治療神經(jīng)炎癥引起的神經(jīng)退行性疾病如PD的藥物靶點(diǎn)。
　　第三部分:FLZ通

12、過(guò)抑制神經(jīng)炎癥減輕側(cè)腦室注射LPS引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙
　　LPS是革蘭氏陰性桿菌細(xì)胞壁的主要成分，可作為炎性刺激物引起機(jī)體的免疫反應(yīng)。我們課題組已畢業(yè)龐紅艷同學(xué)的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)LZ能顯著抑制側(cè)腦室注射LPS引起的神經(jīng)炎癥的發(fā)生，從而減輕炎癥反應(yīng)引起的學(xué)習(xí)記憶功能損傷。通道式水迷宮實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)均能檢測(cè)動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力，在龐紅艷同學(xué)的實(shí)驗(yàn)中選用的是通道式水迷宮檢測(cè)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，而經(jīng)典的Morris水迷宮對(duì)