降脂藥物對B族Ⅰ型清道夫受體表達(dá)和功能的影響.pdf

1、背景 糖尿病血脂代謝異常是目前國內(nèi)外學(xué)者普遍關(guān)注的熱點(diǎn)問題。其血脂異常的特點(diǎn)為甘油三酯(TG)增高、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)降低、小顆粒致密的低密度脂蛋白(LDL)增加。積極糾正血脂代謝紊亂是降低糖尿病患者心血管事件的重要措施。 膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)作為體內(nèi)抗動脈粥樣硬化(As)的重要機(jī)制之一，是一種從外周組織或細(xì)胞向肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)多余膽固醇的動態(tài)過程。整個轉(zhuǎn)運(yùn)過程主要依賴于三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體(ABCA1、ABC

2、G1)和B類Ⅰ型清道夫受體(SR-BI)兩大類受體的介導(dǎo)將外周組織和細(xì)胞中的膽固醇首先流出到乏脂的apoA-Ⅰ或前β-HDL上，然后利用血漿中膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)對HDL和LDL、極低密度脂蛋白(VLDL)之間的膽固醇酯和甘油三酯進(jìn)行交換，再通過肝臟上高密度脂蛋白受體SR-BI選擇性攝取HDL-C或通過低密度脂蛋白受體(LDLR)攝取LDL，最后經(jīng)肝臟進(jìn)以膽酸的形式排泄。 新近發(fā)現(xiàn)的SR-BI是第一個已在分子水平上證實(shí)了

3、的位于細(xì)胞膜表面的HDL受體。體內(nèi)有多種配體，主要生理功能是介導(dǎo)膽固醇在HDL和細(xì)胞之間雙向流動。SR-BI作為HDL的特異性受體，在HDL的代謝以及RCT過程中起著關(guān)鍵性作用。但是目前對糖尿病血脂代謝異常時以及降脂藥物干預(yù)對SR-BI的表達(dá)和功能的影響還有待進(jìn)一步研究。 目的 本研究通過建立糖尿病合并脂質(zhì)代謝異常的動物模型，觀察其肝臟表達(dá)高密度脂蛋白受體SR-BI的變化以及氟伐他汀干預(yù)后對其表達(dá)的影響，探討SR-BI與

4、糖尿病血脂代謝異常尤其是HDL-C降低的相關(guān)機(jī)制；以人肝癌細(xì)胞株HepG2為研究對象，在細(xì)胞水平上觀察多種臨床常用降脂藥物刺激下SR-BI的表達(dá)以及對選擇性攝取HDL能力的影響，為進(jìn)一步闡明SR-BI在HDL代謝、RCT過程以及As發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 1．高糖高脂飲食、一次性腹腔注射鏈脲菌素(STZ)建立糖尿病合并脂質(zhì)代謝異常的金黃地鼠模型。 2．在動物體內(nèi)水平上，采用半定量RT-PC

5、R、Western Blot方法檢測氟伐他汀短期干預(yù)后糖尿病合并脂質(zhì)代謝異常模型組金黃地鼠肝臟上SR-BI的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平表達(dá)的變化。 3．在體外細(xì)胞水平上，采用半定量RT-PCR、Western Blot方法檢測加入PPAR-α抑制劑MK 886后，氟伐他汀、非諾貝特和阿托伐他汀三種藥物分別刺激下HepG2細(xì)胞上SR-BI的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平表達(dá)的變化。 4．對超速離心后得到的HDL采用熒光和放射性核素雙標(biāo)記，研究氟伐他汀

6、刺激下HepG2細(xì)胞對雙標(biāo)記的外源性HDL選擇性攝取能力的變化。 結(jié)果 1．模型組動物表現(xiàn)出空腹血糖值升高、血脂異常以及胰島素敏感指數(shù)降低，符合2型糖尿病特點(diǎn)。 2．在動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，糖尿病合并脂質(zhì)代謝異常金黃地鼠肝臟SR-BI在mRNA和蛋白水平的表達(dá)較正常對照組顯著增加(p<0.05)；氟伐他汀短期治療后促進(jìn)SR—BI的mRNA以及蛋白的表達(dá)，呈劑量和時間依賴性(p<0.05)。 3．在體外細(xì)胞水平上

7、，氟伐他汀、阿托伐他汀均明顯促進(jìn)HepG2細(xì)胞的SR-BImRNA和蛋白表達(dá)，呈劑量和時間依賴效應(yīng)(p<0.05)，PPAR-α抑制劑不能阻斷上述作用，這兩種他汀類藥物的作用沒有顯著性差異；而非諾貝特明顯抑制HepG2細(xì)胞SR-BI mRNA和蛋白表達(dá)，呈劑量和時間依賴效應(yīng)(p<0.05)，這種抑制作用可被PPAR-α抑制劑所阻斷。 4．氟伐他汀促進(jìn)HepG2細(xì)胞選擇性攝取HDL(p<0.05)，具有一定劑量和時間依賴趨勢。

8、 結(jié)論 1．糖尿病合并脂質(zhì)代謝異常金黃地鼠肝臟SR-BImRNA和蛋白的表達(dá)增高。 2．氟伐他汀能夠呈劑量和時間依賴性地提高HepG2細(xì)胞以及糖尿病合并脂質(zhì)代謝異常金黃地鼠肝臟SR-BI mRNA和蛋白的表達(dá)，并且能夠促進(jìn)HepG2細(xì)胞對HDL的選擇性攝取。 3．阿托伐他汀能夠呈劑量和時間依賴性地提高HepG2細(xì)胞SR-BI mRNA和蛋白的表達(dá)，與PPAR-α途徑無關(guān)。 4．非諾貝特能夠通過PPAR