大黃對雌性大鼠生殖毒性與用藥劑量及時間關(guān)系的研究.pdf

1、大黃在中藥組方中應(yīng)用范圍較廣,除臨床日常用藥外,多數(shù)降脂減肥、排毒養(yǎng)顏類中成藥中也含有大黃,現(xiàn)在有許多年輕女性開始長時間大量使用減肥藥,導(dǎo)致大黃非治療目的的長期使用,明顯增高其不良反應(yīng)發(fā)生率。有文獻(xiàn)顯示:大黃可使雄性大鼠睪丸細(xì)胞間質(zhì)和生精上皮受損,顯示出對生殖系統(tǒng)有明顯的毒性作用。本研究以成年雌性大鼠為研究對象,以子宮、卵巢指數(shù)、體重增長率、血清中黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)和子宮、卵巢中bax、bcl-2蛋

2、白表達(dá)水平為指標(biāo),觀察大黃水浸劑對成年雌性大鼠生殖動能的影響及其毒性反應(yīng)的機(jī)制;同時以幼年雌性大鼠為研究對象,選取與成年雌性大鼠相同的指標(biāo)進(jìn)行研究,觀察大黃水浸劑、大黃水煎煮10min和30min劑對幼年雌性大鼠生殖功能的影響及其毒性反應(yīng)的機(jī)制,同時分析其毒性與藥液制備方法的關(guān)系,為進(jìn)一步分析其生殖毒性成分奠定基礎(chǔ)。
　　第一部分大黃對成年雌性大鼠生殖功能的影響
　　目的:
　　觀察大黃水浸劑(RWE)對成年雌性大鼠生

3、殖功能的影響與用藥時間和用藥劑量之間的關(guān)系。
　　方法:
　　8周齡wistar大鼠90只,隨機(jī)分為大黃水浸劑(RWE)1.0 g.kg-1劑量組、2.0 g.kg-1劑量組(生藥量)、正常對照組(NC),各劑量組再隨機(jī)分為灌胃給藥30d,40d,50d,60d組,每組10只。取卵巢、子宮稱重,計算臟器指數(shù)。采用HE染色法進(jìn)行子宮、卵巢病理學(xué)檢查;采用Elisa法檢測血清中LH、FSH、E2含量;采用免疫組化法檢測卵巢、子宮

4、組織中bax、bcl-2蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1對大鼠子宮、卵巢指數(shù)的影響
　　RWE1.0 g.kg-1給藥60d和2.0 g.kg-1給藥40d,50d,60d組大鼠子宮指數(shù)明顯低于NC組(P<0.05或P<0.01);RWE1.0 g.kg-1給藥60d組和2.0 g.kg-1給藥30d,40d,50d,60d組大鼠卵巢指數(shù)明顯低于NC組(P<0.05或P<0.01)。不同給藥劑量相同給藥時間各組間比較

5、:RWE2.0 g.kg-1給藥50d,60d組子宮、卵巢指數(shù)明顯低于RWE1.0 g.kg-1給藥50d,60d組(P<0.05)。相同給藥劑量不同給藥時間各組間比較:RWE1.0 g.kg-1給藥60d組子宮、卵巢指數(shù)明顯低于給藥30d組(P<0.05);RWE2.0 g.kg-1給藥50d、60d組子宮、卵巢指數(shù)明顯低于給藥30d、40d組(P<0.05)。
　　2對大鼠血清中LH、FSH、E2水平的影響
　　RWE2

6、.0 g.kg-1給藥50d,60d組大鼠血清中E2水平明顯低于NC組,LH、FSH水平明顯高于NC組(P<0.05或P<0.01)。不同給藥劑量相同給藥時間各組間比較:RWE2.0 g.kg-1給藥50d,60d組E2水平明顯低于RWE1.0 g.kg-1給藥50d,60d組,LH,FSH水平明顯高于RWE1.0 g.kg-1給藥50d,60d組(P<0.05)。相同給藥劑量不同給藥時間各組間比較:RWE1.0 g.kg-1給藥60d

7、組E2水平明顯低于給藥30d組,LH、FSH水平明顯高于給藥30d組(P<0.05);RWE2.0 g.kg-1給藥50d、60d組E2水平明顯低于給藥30d、40d組,LH、FSH水平明顯高于給藥30d、40d組(P<0.05)。
　　3對大鼠子宮、卵巢中bax、bcl-2蛋白表達(dá)的影響
　　RWE1.0 g.kg-1給藥60d和2.0 g.kg-1給藥40d,50d,60d組大鼠子宮、卵巢中bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于NC

8、組,bax蛋白表達(dá)明顯高于NC組(P<0.05或 P<0.01)。不同給藥劑量相同給藥時間各組間比較:RWE2.0 g.kg-1給藥50d,60d組大鼠子宮、卵巢中bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于RWE1.0 g.kg-1給藥50d,60d組,bax蛋白表達(dá)明顯高于RWE1.0 g.kg-1給藥50d,60d組(P<0.05)。相同給藥劑量不同給藥時間各組間比較:RWE1.0 g.kg-1給藥60d組bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于給藥30d組,b

9、ax蛋白表達(dá)明顯高于給藥30d組(P<0.05);RWE2.0 g.kg-1給藥50d、60d組bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于給藥30d、40d組,bax蛋白表達(dá)明顯高于給藥30d、40d組(P<0.05)。
　　結(jié)論:大黃對成年雌性大鼠子宮、卵巢功能具有較強(qiáng)的毒性,其毒性程度有明顯的時間和劑量依賴關(guān)系。
　　第二部分大黃對幼年雌性大鼠生殖功能的影響
　　目的:
　　觀察大黃水浸劑、大黃水煎煮10min和30min劑

10、分別對幼年雌性大鼠生殖功能的影響與用藥劑量的關(guān)系。
　　方法:
　　4周齡wistar大鼠100只,每組10只,隨機(jī)分為NC組,大黃水浸劑(RWE)0.5 g.kg-1、1.0 g.kg-1和2.0 g.kg-1劑量組,大黃水煎10min(RDA10min)0.5 g.kg-1、1.0 g.kg-1和2.0 g.kg-1劑量組,大黃水煎30min(RDA30min)0.5 g.kg-1、1.0 g.kg-1和2.0 g.kg

11、-1劑量組(均為生藥量),連續(xù)灌胃給藥30 d。取子宮、卵巢稱重,計算臟器指數(shù)。采用HE染色法進(jìn)行子宮、卵巢病理學(xué)檢查;采用Elisa法檢測血清中LH、FSH、E2的含量;采用免疫組化法檢測子宮、卵巢組織中bax、bcl-2蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1對大鼠子宮、卵巢指數(shù)的影響
　　1.1 RWE1.0 g.kg-1和2.0 g.kg-1劑量組,RDA10min各劑量組,RDA30min2.0 g.kg-1劑量組

12、大鼠子宮、卵巢指數(shù)明顯低于NC組(P<0.05或P<0.01)。
　　1.2相同提取方法不同給藥劑量各組間比較:RWE2.0 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢指數(shù)明顯低于RWE0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA10min2.0 g.kg-1、1.0 g.kg-1劑量組子宮、卵巢指數(shù)明顯低于RDA10min0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA30min2.0 g.kg-1劑量組子宮、卵巢指數(shù)明顯低于RD

13、A30min0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05)。
　　1.3相同給藥劑量不同提取方法各組間比較:RDA10min0.5 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢指數(shù)明顯低于RWE0.5 g.kg-1和RDA30min0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA10min1.0 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢指數(shù)明顯低于RWE1.0 g.kg-1和RDA30min1.0 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA10min2

14、.0 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢指數(shù)明顯低于RWE2.0 g.kg-1和RDA30min2.0 g.kg-1劑量組(P<0.05)。
　　2對大鼠血清中LH、FSH、E2水平的影響
　　2.1 RWE1.0 g.kg-1、2.0 g.kg-1劑量組,RDA10min各劑量組,RDA30min2.0 g.kg-1劑量組大鼠血清中E2水平明顯低于NC組,LH、FSH水平明顯高于NC組(P<0.05或P<0.01)。

15、　　2.2相同提取方法不同給藥劑量各組間比較:RWE2.0 g.kg-1劑量組大鼠血清中E2水平明顯低于RWE0.5 g.kg-1劑量組,LH、FSH水平明顯高于RWE0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA10min2.0 g.kg-1、1.0 g.kg-1劑量組大鼠血清中E2水平明顯低于RDA10min0.5 g.kg-1劑量組,LH、FSH水平明顯高于RDA10min0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA30

16、min2.0 g.kg-1劑量組大鼠血清中E2水平明顯低于RDA30min0.5 g.kg-1劑量組,LH、FSH水平明顯高于RDA30min0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05)。
　　2.3相同給藥劑量不同提取方法各組間比較:RDA10min0.5 g.kg-1劑量組大鼠血清中E2水平明顯低于RWE0.5 g.kg-1和RDA30min0.5 g.kg-1劑量組,LH、FSH水平明顯高于RWE0.5 g.kg-1和RDA3

17、0min0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA10min1.0 g.kg-1劑量組大鼠血清中E2水平明顯低于RWE1.0 g.kg-1和RDA30min1.0 g.kg-1劑量組,LH、FSH水平明顯高于RWE1.0 g.kg-1和RDA30min1.0 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA10min2.0 g.kg-1劑量組大鼠血清中E2水平明顯低于RWE2.0 g.kg-1和RDA30min2.0 g.kg-1劑量

18、組,LH、FSH水平明顯高于RWE2.0 g.kg-1和RDA30min2.0 g.kg-1劑量組(P<0.05)。
　　3對大鼠子宮、卵巢中bcl-2、bax蛋白表達(dá)的影響
　　3.1 RWE1.0 g.kg-1、2.0 g.kg-1劑量組,RDA10min各劑量組,RDA30min2.0 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢中bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于NC組,bax蛋白表達(dá)明顯高于NC組(P<0.05或P<0.01)。

19、>　　3.2相同提取方法不同給藥劑量各組間比較:RWE2.0 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢組織中bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于RWE0.5 g.kg-1劑量組,bax蛋白表達(dá)明顯高于RWE0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA10min1.0 g.kg-1、2.0 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢組織中bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于RDA10min0.5 g.kg-1劑量組,bax蛋白表達(dá)明顯高于RDA10min0.5 g.kg

20、-1劑量組(P<0.05);RDA30min2.0 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢組織中bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于 RDA30min0.5 g.kg-1劑量組,bax蛋白表達(dá)明顯高于RDA30min0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05)。
　　3.3相同給藥劑量不同提取方法各組間比較:RDA10min0.5 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢組織中 bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于 RWE0.5 g.kg-1和RDA30min0.5

21、 g.kg-1劑量組,bax蛋白表達(dá)明顯高于 RWE0.5 g.kg-1和RDA30min0.5 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA10min1.0 g.kg-1劑量組大鼠子宮、卵巢組織中bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于RWE1.0 g.kg-1和RDA30min1.0 g.kg-1劑量組,bax蛋白表達(dá)明顯高于RWE1.0 g.kg-1和RDA30min1.0 g.kg-1劑量組(P<0.05);RDA10min2.0 g.kg-1