大黃對雄性大鼠的生殖毒性研究.pdf

1、大黃為我國常用的中藥之一,在多種疾病的治療中起重要作用,被稱為中藥“四大金剛”之一,臨床應(yīng)用廣泛,全國8000多種中成藥制劑中約有800多種含有大黃。大黃主要有效成分為蒽醌類化合物,包括大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚等。雖然傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)并未將其列為有毒藥物,但近年來關(guān)于大黃不良反應(yīng)的報道屢見不鮮,造成其不良反應(yīng)發(fā)生率增高的原因是多方面的,其中濫用和用藥療程過長是主要原因之一。尤其是多數(shù)的降脂減肥、排毒養(yǎng)顏類中成藥中均含有大黃

2、,造成大黃的長期、非適應(yīng)癥性用藥。有報道大黃對生殖系統(tǒng)有一定的毒性。為了探討大黃的生殖毒性,毒性反應(yīng)的程度及其與用藥劑量、用藥時間的關(guān)系,以及其毒性反應(yīng)與動物的生理發(fā)育階段的關(guān)系,本研究以成年及幼年大鼠為觀察對象,以睪丸指數(shù)、精子數(shù)、精子活動率及畸變率為觀察指標(biāo),觀察不同劑量的大黃水提取物、總蒽醌對不同年齡大鼠的生殖功能的影響。并以血清中睪酮、黃體生成素、卵泡刺激素和睪丸中bcl-2、bax蛋白表達(dá)水平為指標(biāo),初步探討了大黃毒性反應(yīng)的機(jī)

3、制。旨在為大黃的臨床安全、合理應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　第一部分:大黃對成年雄性大鼠的生殖毒性與劑量關(guān)系研究
　　目的:
　　探討長期應(yīng)用大黃提取物對雄性成年大鼠生殖功能的影響與用藥劑量的關(guān)系。
　　方法:
　　8周齡SD大鼠50只,隨機(jī)分為正常對照組(NC組),大黃水提取物(RWE)0.3g·kg-1、0.6g·kg-1、1.2g·kg-1劑量組及大黃總蒽醌(RTA)0.1g·kg-1劑量組。連續(xù)灌胃(ig

4、)給藥30天。取睪丸和附睪稱重,計算臟器指數(shù)。采用HE染色法進(jìn)行病理學(xué)檢查,采用紅細(xì)胞計數(shù)法檢測精子數(shù),采用伊紅活體染色法檢測精子活動率和畸變率,采用ELISA法檢測血清中睪酮(T)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)濃度;采用免疫組化SP法檢測睪丸Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　RWE各組及RTA組大鼠精子數(shù)量和活動率均明顯低于NC組,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),精子畸變率與NC組比較

5、差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);血清中T明顯低于NC組,LH及FSH顯著高于NC組,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);睪丸生精上皮和睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白表達(dá)顯著高于NC組,而Bcl-2蛋白表達(dá)顯著低于NC組,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　長期應(yīng)用大黃對成年大鼠睪丸功能有較強(qiáng)的毒性,促使睪丸細(xì)胞凋亡,其中以間質(zhì)細(xì)胞凋亡最顯著,從而減少T的合成,其毒性反應(yīng)程度有明顯的劑量依賴關(guān)系。

6、r>　　第二部分:大黃對幼年雄性大鼠生殖毒性的影響
　　目的:
　　探討長期應(yīng)用RWE及RTA對幼年雄性大鼠生殖功能的影響。
　　方法:
　　3周齡SD大鼠50只,隨機(jī)分為NC組,RWE0.3g·kg-1、0.6g·kg-1、1.2g·kg-1劑量組及RTA0.1g·kg-1劑量組。連續(xù)ig給藥30天。取睪丸和附睪稱重,計算臟器指數(shù)。采用HE染色法進(jìn)行病理學(xué)檢查,采用紅細(xì)胞計數(shù)法檢測精子數(shù)量,采用伊紅活體染色法檢

7、測活動率和畸變率,采用ELISA法檢測血清中T、LH、FSH濃度;采用免疫組化SP法檢測睪丸Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　RWE0.6g·kg-1、1.2g·kg-1組和RTA組睪丸、附睪指數(shù)均明顯低于NC組(P<0.05);所有給藥組大鼠精子數(shù)量和活動率均明顯低于NC組,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),精子畸變率與NC組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);血清中T含量明顯低于NC組,LH及F

8、SH含量顯著高于NC組,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);睪丸生精上皮和睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白表達(dá)顯著高于NC組,而Bcl-2蛋白表達(dá)顯著低于NC組,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而成年大鼠組RWE0.3g·kg-1組的精子活動率、睪丸和附睪重量及指數(shù)、T、LH、FSH水平與NC組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),幼年大鼠組RWE0.3g·kg-1組的精子活動率、睪丸重量、T、LH和FSH水平與NC組比較差異具

9、有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　長期應(yīng)用大黃對幼年雄性大鼠生殖功能的影響強(qiáng)于成年大鼠,幼年大鼠對大黃的耐受性明顯低于成年大鼠,提示其對發(fā)育期雄性動物生殖功能影響更強(qiáng),其毒性反應(yīng)程度有明顯的劑量依賴關(guān)系。
　　第三部分:大黃對成年雄性大鼠生殖毒性與給藥時間關(guān)系的研究
　　目的:
　　探討RWE對成年雄性大鼠生殖毒性與給藥時間的關(guān)系。
　　方法:
　　8周齡SD大鼠60只,隨機(jī)

10、分為6組,NC組10只,其余各組給予同等劑量RWE,分別于給藥0天、20天、30天、40天、50天、60天各處死10只大鼠。取睪丸和附睪稱重,計算臟器指數(shù)。采用HE染色法進(jìn)行病理學(xué)檢查,采用紅細(xì)胞計數(shù)法檢測精子數(shù)量,采用伊紅活體染色法檢測活動率和畸變率,采用ELISA法檢測血清中T、LH、FSH濃度;采用免疫組化SP法檢測睪丸Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　給藥40、50及60天組大鼠睪丸指數(shù)均明顯低于NC

11、組、20天和30天組(P<0.05);所有給藥組大鼠精子數(shù)量和活動率均明顯低于NC組,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),精子畸變率與NC組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);血清中T濃度明顯低于NC組,LH及FSH濃度顯著高于NC組,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);睪丸生精上皮和睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白表達(dá)顯著高于NC組,而Bcl-2蛋白表達(dá)顯著低于NC組,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);而50天和60天組