吸煙對(duì)雄性大鼠生殖毒性的機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究吸煙對(duì)大鼠下丘腦-垂體-睪丸軸相關(guān)激素的影響及對(duì)睪丸細(xì)胞的毒性作用，通過對(duì)相關(guān)凋亡基因研究分析其可能的機(jī)制；研究香煙煙霧提取物對(duì)睪丸細(xì)胞的細(xì)胞毒性，分析其可能機(jī)制。
　　方法：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法，選用5周SD大鼠80只，分為對(duì)照組與吸煙組，吸煙組采用靜式染毒，每天1次，每次2h，連續(xù)8周；對(duì)照組采用空白對(duì)照。實(shí)驗(yàn)第2周、第4周、第6周與第8周分別處死對(duì)照組與吸煙組大鼠10只，測(cè)定各種指標(biāo)。放射免疫法測(cè)定血清中睪酮、黃體生成激素

2、、卵泡雌激素、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1及下丘腦促性腺激素釋放激素；HE染色觀察睪丸的結(jié)構(gòu)形態(tài)；TUNEL法定性、定量測(cè)定睪丸的細(xì)胞凋亡；Western Blot檢測(cè)各組大鼠睪丸組織中Fas/FasL與Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)各組大鼠睪丸組織中Fas/FasL與Bcl-2/BaxmRNA表達(dá)。用細(xì)胞培養(yǎng)研究香煙煙霧提取物對(duì)大鼠睪丸的支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞與生精細(xì)胞的影響。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于試驗(yàn)，三種睪丸細(xì)胞培養(yǎng)，按照CSE干

3、預(yù)濃度不同，將試驗(yàn)分為三組：0％CSE組、5%CSE組、10%CSE組。各組細(xì)胞培養(yǎng)12h后，采用MTT法檢測(cè)CSE對(duì)細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的情況，生物化學(xué)的方法檢檢測(cè)胞外乳酸脫氫酶的改變。
　　結(jié)果：1）隨著時(shí)間延長(zhǎng)，吸煙組大鼠體重明顯低于對(duì)照（P＜0.05）；2）大鼠血清中睪酮含量自第四周起吸煙組明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）；吸煙組大鼠血清T含量隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)明顯下降（P＜0.05）；3）大鼠血清中黃體生成素

4、含量在對(duì)照組有隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增高，在吸煙組則隨時(shí)間下降；第四周起吸煙組大鼠血清中黃體生成素含量明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）；4）大鼠血清中卵泡刺激素在對(duì)照組與吸煙組含量穩(wěn)定，自第二周起吸煙組含量明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）；5）大鼠血清中胰島素樣生長(zhǎng)因子-1含量隨時(shí)間下降，吸煙組大鼠血清中胰島素樣生長(zhǎng)因子-1在第八周含量明顯低于第二周、第四周與第六周（P＜0.05），吸煙組第二周、第六周和第八周均明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）；6

5、）大鼠下丘腦促性腺激素釋放激素?zé)o論是對(duì)照組還是吸煙組隨時(shí)間延長(zhǎng)而升高，吸煙組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；7）睪丸HE染色發(fā)現(xiàn)吸煙可以導(dǎo)致睪丸結(jié)構(gòu)組織的破壞，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，組織改變明顯加深。第八周組吸煙組睪丸組織出現(xiàn)明顯的萎縮，大量的細(xì)胞裂解，細(xì)精管與間質(zhì)組織出現(xiàn)明顯的變性改變；8）TUNEL法測(cè)定睪丸細(xì)胞的凋亡率，吸煙組第四周、第六周、第八周細(xì)胞凋亡率明顯增高（P＜0.05）；9）吸煙組大鼠睪丸組織中Fas/FasL

6、與Bax蛋白上調(diào)，Bcl-2蛋白下調(diào)；Fas/FasL、Bax基因的mRNA表達(dá)水平有上調(diào)的趨勢(shì)，結(jié)果與蛋白表達(dá)相同。吸煙第八周大鼠睪丸的Fas/FasL、Bax基因表達(dá)水平明顯上升（P＜0.05），Bcl-2mRNA下調(diào)明顯（P＜0.05）10）香煙煙霧提取物對(duì)支持細(xì)胞增值的影響沒有顯著性差異（P＞0.05）；對(duì)間質(zhì)細(xì)胞、生精細(xì)胞增值隨濃度的升高出現(xiàn)明顯的下降（P＜0.05），且呈現(xiàn)一定的劑量反應(yīng)關(guān)系；香煙煙霧提取物組的睪丸支持細(xì)胞、

7、間質(zhì)細(xì)胞和生精細(xì)胞組胞外LDH活力明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）；11）流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)果表明CSE導(dǎo)致支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和生精細(xì)胞組胞凋亡率上升。
　　結(jié)論：吸煙是青春期大鼠生殖系統(tǒng)發(fā)育的有害因素，不僅下丘腦-垂體-睪丸軸中重要的激素有影響，而且對(duì)睪丸組織與細(xì)胞有不利影響，其可能的機(jī)制是吸煙激活了細(xì)胞凋亡調(diào)控基因，導(dǎo)致相應(yīng)蛋白表達(dá)增加，同時(shí)抑制了保護(hù)性蛋白的表達(dá)；香煙煙霧提取物中含有導(dǎo)致睪丸支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和生精細(xì)胞凋亡的化學(xué)