白樺BpFLC基因的過量表達(dá)及RNAi遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、FLC基因，是開花植物中的一個(gè)調(diào)節(jié)植物開花進(jìn)程的關(guān)鍵基因，它是一個(gè)抑制開花基因，特別是在春化過程中起到關(guān)鍵作用。白樺中存在的FLC基因，即BpFLC基因。本文研究了白樺的FLC基因?qū)Π讟宓纳成L和營養(yǎng)生長的一些影響以及構(gòu)建BpFLC-RNAi干擾表達(dá)載體轉(zhuǎn)入白樺后，再對(duì)轉(zhuǎn)入后的白樺的FLC表達(dá)量進(jìn)行測定以及后續(xù)的研究。
　　通過熒光定量PCR的方法，檢測了BpFLC基因在白樺不同生長時(shí)期的表達(dá)量，檢測結(jié)果是:BpFLC基因在白樺

2、的不同生長時(shí)期中均有表達(dá)，但在5年生及多年生白樺苗中的表達(dá)量最低。檢測BpFLC基因在5年生白樺的一年里不同時(shí)間的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn):BpFLC基因在一年中均有表達(dá)，但5月和6月的表達(dá)量最低。此外，對(duì)BpFLC基因過表達(dá)的白樺苗和野生型對(duì)照分別測量了移栽后4個(gè)月、6個(gè)月和8個(gè)月的株高，分析發(fā)現(xiàn):6號(hào)、8號(hào)和10號(hào)株系與野生型白樺株高差異顯著，且隨著白樺生長，6號(hào)和8號(hào)株高差異變得更加顯著。對(duì)BpFLC基因過表達(dá)的白樺苗和野生型對(duì)照分別測量了移

3、土后9個(gè)月的地徑，分析發(fā)現(xiàn)4號(hào)和9號(hào)株系與野生型差別顯著，10號(hào)極顯著。說明BpFLC基因的過量表達(dá)對(duì)白樺的株高及地徑有一定的影響。對(duì)休眠后的BpFLC基因過表達(dá)白樺與野生型白樺進(jìn)行生長狀態(tài)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn):BpFLC基因過表達(dá)白樺與野生型白樺的整體生長狀態(tài)差異不大，推測BpFLC基因的過量表達(dá)對(duì)白樺休眠后的總體生長狀態(tài)基本沒有影響，但4、8、10和11號(hào)株系經(jīng)歷休眠后，與野生型相比，較容易從基部長出新枝，且4和11號(hào)長出新枝數(shù)量較多。<

4、br>　　為了后期實(shí)驗(yàn)造林，本文中對(duì)BpFLC基因過表達(dá)的白樺組培苗進(jìn)行擴(kuò)繁培養(yǎng)，從最初的組培苗切莖段長到愈傷、再從愈傷長成叢生苗、從叢生苗到生根苗，最后移到花盆土中，需要5到6個(gè)月的時(shí)間。目前已經(jīng)擴(kuò)繁550到600株，用于后期實(shí)驗(yàn)林的建設(shè)及研究。
　　構(gòu)建了BpFLC-RNAi干擾表達(dá)載體，利用液氮凍融法轉(zhuǎn)入到EHA105農(nóng)桿菌中，得到轉(zhuǎn)化子，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)白樺進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，得到了5個(gè)株系。通過熒光定量PCR的方法，測得轉(zhuǎn)