甘蔗eEF1A基因表達及遺傳轉化的研究.pdf

1、eEF1A（eukaryotic elongation factor1 A）是真核細胞內主要的翻譯因子，不僅將GTP和氨?；鵢tRNrA運至核糖體上，催化氨基酸鏈的延伸而推動、控制蛋白質的合成，在細胞中還發(fā)揮著許多作用，參與細胞生長、應激反應及運動性有關的信號傳導。在本課題組拼接獲得甘蔗eEF1A基因cDNA全長的基礎上，進一步進行甘蔗eEF1A的表達和功能的研究，取得以下結果：
　　 1．Southern雜交證明甘蔗eEF1A

2、在甘蔗基因組中確實存在，并且是多拷貝基因。
　　 2．Northern雜交表明甘蔗eEF1A只在甘蔗未成熟莖段有高水平表達，在正在成熟莖段和已成熟莖段低水平表達，并且乙烯利處理可以誘導eEF1A在未成熟莖段持續(xù)高效表達。
　　 3．采用RT-PCR方法克隆了1420bp的甘蔗eEF1A編碼區(qū)cDNA片段，反向插入植物表達載體pBI121的CaMV35S啟動子和GUS報告基因之間，構建了以NPTⅡ基因為抗性選擇標記的eEF

3、1A基因反義植物表達載體。
　　 4．通過農桿菌介導系統(tǒng)成功將反義eEF1A基因遺傳轉化煙草K346（Nicotiana tobaccum L．），獲得34株轉基因植株。反義轉基因煙草移栽后，表現(xiàn)出生長緩慢、葉數減少、株高變矮、開花延遲的現(xiàn)象及植物體內總蛋白質含量降低，并出現(xiàn)了兩種變異類型。初步證實甘蔗eEF1A在煙草中的反義表達，能夠抑制部分煙草內源eEF1A基因的活力。推測轉反義eEF1A基因煙草形態(tài)的變化與eEF1A的表達