蒺藜苜蓿防御素基因MtDef4遺傳轉(zhuǎn)化甘蔗的研究.pdf

1、甘蔗(Saccharum officinarum L.)是一種重要的糖料和經(jīng)濟(jì)作物,但日益嚴(yán)重的病害卻制約了甘蔗產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,而甘蔗黑穗病是對(duì)其危害最嚴(yán)重的一種病害。傳統(tǒng)的防治方法對(duì)黑穗病的防治效果甚微,利用植物基因工程技術(shù)把抗病基因?qū)敫收醿?yōu)良品種中使其得到有效表達(dá)從而表現(xiàn)出抗病性是防治甘蔗真菌病害最為有效的途徑之一。
　　 蒺藜苜蓿防御素MtDef4是從蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)中分離得到的一種植物防御

2、素,具有很好的抗真菌活性。因此,將MtDef4基因?qū)敫收醿?yōu)良品種中使其得到有效表達(dá),可望提高甘蔗對(duì)黑穗病的抗性。
　　 本研究分別構(gòu)建了以Bar基因作為篩選標(biāo)記的native MtDef4/KDEL基因和syntheticMtDef4/KDEL基因的植物表達(dá)載體pADN和pADS;并采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)甘蔗胚性愈傷組織進(jìn)行轉(zhuǎn)化,經(jīng)PPT抗性篩選和PCR檢測(cè),獲得了轉(zhuǎn)native MtDef4/KDEL基因植株92株,轉(zhuǎn)synth

3、etic MtDef4/KDEL基因植株47株;從轉(zhuǎn)native MtDef4/KDEL基因植株中選取6株進(jìn)行目的基因的RT-PCR檢測(cè),5株呈陽(yáng)性,從轉(zhuǎn)synthetic MtDef4/KDEL基因植株中選取8株進(jìn)行目的基因的RT-PCR檢測(cè),4株呈陽(yáng)性,初步證明nativeMtDef4/KDEL基因和synthetic MtDef4/KDEL基因已整合到甘蔗的基因組中并在轉(zhuǎn)錄水平上得到了表達(dá).
　　 另外,本研究對(duì)采自海南省